اورانج اسوأ انترنت منزلي في مصر

 عيوب الاشتراك في اورانج انترنت منزلي

1. الكوتة بتخلص بسرعة جداً مقارنة بباقي الشركات
2. انت مجبر تشتري راوتر اورانج ب1700 جنيه رغم ان عندك راوتر شركة اخرى.. الا لو انت شاري راوتر مفتوح من السوق وليس من شركات الانترنت. كل شركة للأسف بتفرض عليك الراوتر الخاص بهم اللي ميفعش يشتغل الا عندهم فقط ! مش عارف ازاى جهاز تنظيم الاتصالات سامح لهم بالتصرف الاحتكاري دة وكاننا سلعة في ايديهم يبيعوا ويشتروا فينا براحتهم!
3. لما تفاجأ بان الكوتة خلصت وعايز تجدد بدري مينفعش لازم تنتظر غصب عنك حتى ميعاد التجديد الشهري القادم. دي سياسة اورانج تخيلوا !
4. بيجبروك تشتري جيجات اضافية والا تقضي باقي الشهر ذليل بسرعة متفتحش اى حاجة اصلاً
5. خدمة عملاء سيئة ويبدو ان مفيش رقابة على اسلوبهم في الشات ولو طلبتهم بالتليفون لازم تنتظر بالساعات عشان يردوا عليك
6. تطبيق اورانج اكتر تطبيق متخلف ممكن تشوفه في حياتك !
7. كل مرة تفتح التطبيق يسألك انت مين ولازم تفتكر الباسورد ورقم الارضي.. كل مرة ! تطبيق متخلف بكل معنى الكلمة !
8. التطبيق مصمم اساساً لخدمات الموبايل ومش عاملين حساب الانترنت المنزلي فيه
9. مينفعش تقدم استفسار او شكوى بخصوص الانترنت المنزلي من خلال التطبيق
10. مفيش رسائل بتتبعت لك سواءا لتذكيرك بميعاد التجديد ولا انك دفعت ولا رصيدك كام ولا اى شئ! 
11. لو دفعت مقدماً مفيش حاجة تعرف منها رصيدك بقى كام لا من التطبيق ولا رسايل. مع اورانج انت مع المجهول !

لا انصحكم ابدا بالاشتراك في اورانج - حتى لو اغروك بعروضهم - لانك حتدفع اكتر بكتير مما كنت فاكر انك حتوفره

بصراحة وي WE رغم جبروتها في قطع الخدمة في نفس يوم التجديد وكإنك في جوانتانامو - الا ان جوانتانامو وي افضل من اورانج في كل النواحي

فوائد بيكربونات الصوديوم للكلى والالتهابات والشيخوخة

زيورخ المستودع والأرشيف المفتوح

مكتبة جامعة جامعة زيورخ Strickhofstrasse 39 CH-8057 زيورخ www.zora.uzh.ch






السنة: 2022






العلاج بالقلويات يحمي وظائف الكلى، ويمنع الالتهاب، ويحسن التمثيل الغذائي الخلوي في أمراض الكلى

القس أرويو، إيفا ماريا؛ ياسيني، نعمة الأماكن القريبة: روسو، جيانكارلو برجوازي، سولين؛ محبى, نيلوفار ; أمان، كريستين جولر, نيكول ; فاغنر، كارستن أ؛ إيمينيز سيلفا، بيدرو هنريكي




ملخص: يؤثر مرض الكلى المزمن (CKD) على ما يقرب من 10-13٪ من السكان في جميع أنحاء العالم ويشكل وقف تطوره تحديًا سريريًا كبيرًا. يعد الحماض الأيضي نتيجة ومحركًا محتملاً لتطور مرض الكلى المزمن. العلاج القلوي يقاوم هذه التأثيرات لدى مرضى مرض الكلى المزمن، ولكن الآليات الأساسية لا تزال غير مفهومة بشكل كامل. نوضح هنا أن مكملات البيكربونات تحمي وظيفة الكلى في نموذج CKD الفئران الناجم عن نظام غذائي غني بالأكسالات. لم يكن للعلاج القلوي أي تأثير على محور الألدوستيرون والإندوثيلين ولكنه عزز مستويات بروتين كلوثو المضاد للشيخوخة. علاوة على ذلك، فإنه يثبط جزيئات الالتصاق المطلوبة لغزو الخلايا المناعية إلى جانب تقليل الخلايا التائية المساعدة وغزو الخلايا الوحيدة الالتهابية. تكشف مقارنة النسخ من نموذج اعتلال البلورات الفأري ومن الخزعات البشرية لمتلقي زرع الكلى (KTRs) الذين يعانون من الحماض مع أو بدون علاج قلوي، النقاب عن استجابات النسخ المتوازية المرتبطة بشكل رئيسي باستقلاب الدهون ونشاط الأكسدة. تكشف بياناتنا عن مسارات جديدة مرتبطة بالحماض في أمراض الكلى وحساسة للعلاج القلوي وتحدد الأهداف المحتملة التي قد يعمل من خلالها العلاج القلوي على مرض الكلى المزمن والتي قد تكون قابلة للعلاجات الأكثر استهدافًا.




دوي: https://doi.org/10.1042/cs20220095




تم النشر في مستودع وأرشيف زيورخ المفتوح، جامعة زيورخ ZORA URL: https://doi.org/10.5167/uzh-218512

مقالة في المجلة النسخة المنشورة










العمل التالي مرخص بموجب رخصة المشاع الإبداعي: ​​Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 International (CC BY-NC-ND 4.0).




نشرت أصلا في:

القس أرويو، إيفا ماريا؛ ياسيني، نعمة؛ ساكيري، إليف؛ روسو، جيانكارلو؛ برجوازي، سولين؛ محبى، نيلوفار؛ أمان، كيرستين؛ جولر، نيكول؛ فاغنر، كارستن أ؛ إيمينيز سيلفا، بيدرو هنريكي (2022). العلاج القلوي يحمي وظائف الكلى، ويمنع الالتهاب، ويحسن التمثيل الغذائي الخلوي في أمراض الكلى. العلوم السريرية، 136(8):557-577.

دوي: https://doi.org/10.1042/cs20220095
























مقاله بحثيه

العلاج بالقلويات يحمي وظائف الكلى، ويمنع الالتهاب، ويحسن التمثيل الغذائي الخلوي في أمراض الكلى

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



إيفا ماريا باستور أرويو 1,2 ، نيما ياسيني 1,3 ، إليف ساكيري 3 ، جيانكارلو روسو 4,5 ، سولين بورجوا 1,2 ،

نيلوفار محبي 2.6 ، كيرستين أمان 7 ، نيكول جولر 3 ، كارستن أ. فاغنر 1.2 و

بيدرو هنريكي إيمينيز سيلفا 1.2



1 معهد علم وظائف الأعضاء، جامعة زيوريخ، زيوريخ، سويسرا؛ 2 المركز الوطني للكفاءة في مجال البحوث، NCCR Kidney.CH، سويسرا؛ 3 معهد علم المناعة التجريبي، جامعة زيوريخ، زيوريخ، سويسرا؛ 4 مركز الجينوم الوظيفي Zu¨rich، جامعة Zu¨rich وETH زيوريخ، زيوريخ، سويسرا؛ 5 المعهد الشريك EMBL للجينوم، مركز تحرير علوم الحياة، جامعة فيلنيوس، فيلنيوس، ليتوانيا؛ القسم السادس لأمراض الكلى، مستشفى جامعة زيوريخ، زيوريخ، سويسرا؛ 7 قسم أمراض الكلى، معهد علم الأمراض، مستشفى جامعة إرلانجن، جامعة فريدريش ألكسندر إرلانجن-نورنبرج، إرلانجن، ألمانيا

المراسلة: بيدرو هنريكي إيمينيز سيلفا ( pedrohenrique.imenezsilva@uzh.ch )





يؤثر مرض الكلى المزمن (CKD) على ما يقرب من 10-13٪ من السكان في جميع أنحاء العالم، ويمثل وقف تطوره تحديًا سريريًا كبيرًا. يعد الحماض الأيضي نتيجة ومحركًا محتملاً لتطور مرض الكلى المزمن. العلاج القلوي يقاوم هذه التأثيرات لدى مرضى مرض الكلى المزمن، ولكن الآليات الأساسية لا تزال غير مفهومة بشكل كامل. نوضح هنا أن مكملات البيكربونات تحمي وظيفة الكلى في نموذج CKD الفئران الناجم عن نظام غذائي غني بالأكسالات. لم يكن للعلاج القلوي أي تأثير على محور الألدوستيرون والإندوثيلين ولكنه عزز مستويات بروتين كلوثو المضاد للشيخوخة. علاوة على ذلك، فإنه يثبط جزيئات الالتصاق اللازمة لغزو الخلايا المناعية إلى جانب تقليل الخلايا التائية المساعدة وغزو الخلايا الوحيدة الالتهابية. تكشف مقارنة النسخ من نموذج اعتلال البلورات الفأري ومن الخزعات البشرية لمتلقي زرع الكلى (KTRs) الذين يعانون من الحماض مع أو بدون علاج قلوي، النقاب عن استجابات النسخ المتوازية المرتبطة بشكل رئيسي باستقلاب الدهون ونشاط الأكسدة. تكشف بياناتنا عن مسارات جديدة مرتبطة بالحماض في أمراض الكلى وحساسة للعلاج القلوي وتحدد الأهداف المحتملة التي قد يعمل من خلالها العلاج القلوي على مرض الكلى المزمن والتي قد تكون قابلة للعلاجات الأكثر استهدافًا.









تم الاستلام: 09 فبراير 2022

تمت المراجعة: 24 مارس 2022

تم القبول: 07 أبريل 2022

المخطوطة المقبولة على الإنترنت: 07 أبريل 2022

تم نشر نسخة السجل: 21 أبريل 2022

مقدمة

يؤثر مرض الكلى المزمن (CKD) على أكثر من 10-13٪ من سكان العالم ويسبب معدلات مراضة ووفيات مفرطة عند التقدم إلى مرض الكلى في المرحلة النهائية (ESKD) [1،2]. لا يوجد علاج فعال قادر على إيقاف تطور مرض الكلى المزمن بشكل كامل، في حين تهدف العديد من العلاجات إلى تحسين أعراض وعواقب مرض الكلى المزمن وكذلك إبطاء التقدم [1]. يعد الحماض الأيضي المزمن العلني سمة شائعة في المراحل المتأخرة من مرض الكلى المزمن ويؤثر على معظم المرضى. في حين أن المراحل المبكرة من مرض الكلى المزمن لا تتميز عادة بالحماض الاستقلابي العلني، فقد يتطور الحماض الإوبيكربوناتي المحدد بواسطة احتباس الحمض تحت الإكلينيكي [3-6]. يؤدي انخفاض وظائف الكلى إلى إضعاف القدرة على إفراز الحمض وبالتالي إضعاف إعادة الامتصاص وتوليد البيكربونات. أشارت دراسات متعددة إلى أن الحماض الأيضي هو أيضًا محرك لتطور مرض الكلى المزمن، وقد أظهرت التجارب على القوارض أن الحماض الأيضي يمكن أن يقلل من وظائف الكلى أو يؤدي إلى تفاقم إصابة الكلى المؤكدة [7-11]. لذلك، قد تشكل كلتا الحالتين المزمنتين حلقة مفرغة تؤدي إلى مرض ESKD. الالتهاب الموضعي ونقص الأكسجة، وهو أمر شائع في أمراض الكلى ذات مسببات مختلفة، يمكن أن يسبب أيضًا تحمضًا موضعيًا [12] قبل أي تغييرات يمكن اكتشافها في حالة الحمض القاعدي الجهازي.

وقد تم اقتراح الآليات الكامنة وراء الآثار الضارة للحماض على تطور مرض الكلى المزمن. تراكم الأمونيوم في النسيج الخلالي الكلوي مما يؤدي إلى المسار التكميلي البديل [13]،




أو احتباس الحمض المحلي (H + ) مما يؤدي إلى زيادة إنتاج الهرمونات المؤيدة للتليف وارتفاع ضغط الدم، مثل الألدوستيرون، والإندوثيلين، والأنجيوتنسين-II [3،14]. وستكون كلتا الآليتين مسؤولتين في نهاية المطاف عن الفقدان التدريجي لوظائف الكلى. يمكن أن يؤدي العلاج بالقلويات إلى إبطاء هذه الآليات عن طريق تقليل احتباس الأمونيوم والحمض. الأدلة التي تثبت أن هذه المسارات تتفاعل مع العلاج القلوي تأتي بشكل رئيسي من الدراسات التي تستخدم

الفئران التي تم استئصال الكلية جزئيًا ونماذج الكلى الكيسية [15]. الآليات الإضافية التي قد تساهم في تأثيرات العلاج القلوي هي التأثيرات الأيضية المباشرة للسيترات [16] أو وظائف حماية الكلى لـ α -klotho الحساسة لمكملات البيكربونات [17]. أيضًا، تم إثبات تحفيز الاستجابة المناعية الكولينية المضادة للالتهابات عن طريق مكملات البيكربونات عن طريق الفم، ولكن لم يتم تناول أهميتها لأمراض الكلى حتى الآن [9].

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



قد تؤدي العوامل القلوية إلى قطع الحلقة المفرغة للحماض ومرض الكلى المزمن وإبطاء تطور المرض. ما إذا كانت العلاجات القلوية تعمل أيضًا بشكل مستقل عن تصحيح الأنسجة الكلوية المحلية و/أو الحماض الجهازي، فهي تظل غير معروفة. على الرغم من التقدم المحرز في التعرف على الفوائد السريرية للعلاج القلوي، فإن طريقة العمل الجزيئية والخلوية ظلت غير مفهومة بشكل كامل. يعد تحديد المسارات التي تساهم في التأثيرات المفيدة للقلويات أمرًا ضروريًا لتطوير علاجات مستهدفة وأكثر قوة لوقف تطور مرض الكلى المزمن. في هذه الدراسة، نظهر أن (1) القلويات تؤدي إلى تأثير مناعي قوي في نموذج فأر لاعتلال الكلية البلوري، و

(2) تعد الاستجابات المناعية واستقلاب الخلايا الأنبوبية من بين المسارات التي يستهدفها العلاج القلوي في النسخ البشرية والماوس.




المواد والأساليب

اعتلال الكلية بالأكسالات والعلاج القلوي

تعرض ذكور الفئران C57BL/6JRj البالغة من العمر 10 أسابيع (جانفييه، فرنسا) إلى 3 أيام من التكيف مع نظام غذائي خالٍ من الكالسيوم (S7042-E005S المشعع، Ssniff Spezialdia¨ten GmbH، Soest، ألمانيا)، تليها 10 أيام من الحث المرحلة مع نظام غذائي خالٍ من الكالسيوم أو 0.67٪ أكسالات في نظام غذائي خالٍ من الكالسيوم (المشعع S7042-E010)، والذي تم تسميته هنا باسم مجموعة التحكم ومجموعة اعتلال الكلية البلوري، على التوالي، كما هو موضح في [18]. بعد ذلك، خضعت الفئران لمرحلة تعافي، حيث تم استبدال كلا النظامين الغذائيين بنظام غذائي قياسي لمدة 4 أسابيع (3433، كليبا، كايزيروغست، سويسرا). تم توفير ما مجموعه 0.2 M NaHCO 3 في الماء المعقم بالشهرة إما من اليوم الأول لتحريض اعتلال الكلية (العلاج القلوي الوقائي) أو من اليوم الأول للشفاء (العلاج القلوي العلاجي) حتى وقت القتل. شربت مجموعات إضافية الماء العادي المعقم (غير المعالج) أو 0.2 م كلوريد الصوديوم. قُتل فئران في مجموعة 0.2 M NaCl (بسبب الوصول إلى نقطة النهاية الإنسانية) في الأسبوع الثالث من التعافي. لقد جمعنا الأعضاء، وليس البول، من الحيوانات التي قُتلت في فترات زمنية سابقة وأدرجنا بياناتها في الدراسة. تم استبعاد الحيوانات التي وصلت إلى نقاط النهاية الإنسانية في فترة الحث أو في الأسبوع الأول من الشفاء من الدراسة (واحدة من مجموعة كلوريد الصوديوم في اليوم الرابع من الشفاء واثنتان من مجموعة العلاج القلوي العلاجي المعني، في اليوم العاشر من الحث و اليوم الثاني من التعافي). تم إيواء الفئران ثلاث مرات في أقفاص استقلابية: خلال الأيام الأربعة لتحريض اعتلال الكلية؛ وفي يومي التعافي الرابع والخامس؛ وآخر 48 ساعة قبل القتل. تم جمع البول تحت الزيت خلال الـ 24 ساعة الأخيرة من كل فترة إسكان القفص الأيضي، وتم تسجيل وزن الجسم وتناول الطعام والماء وحجم البول. لقد لاحظنا في الدراسات التجريبية أنه تم تحقيق تباين أقل داخل المجموعة عندما تم إجراء تحريض اعتلال الكلية بالأكسالات في أقفاص التمثيل الغذائي. تم قتل ثلاثة بالمائة من الفئران المخدرة بالإيزوفلوران عن طريق استنزاف الدم يليه خلع عنق الرحم، وتم جمع البلازما والكلى. تم إجراء جميع التجارب على الحيوانات في جامعة زيوريخ (زيوريخ، سويسرا) وفقًا للإجراءات التي وافق عليها المكتب البيطري للجنة كانتون زيوريخ للبحوث الحيوانية.




البيانات البشرية

أجرينا استخراج الحمض النووي الريبي (RNA) من 22 خزعة لزراعة الكلى، بما في ذلك 9 خزعات من متلقي زرع الكلى (KTRs) الذين يعانون من الحماض الأيضي (يُعرف ببيكربونات الدم < 22 مليمول / لتر)، و9 خزعات من KTRs بدون حماض استقلابي، و4 خزعات من KTRs مع الحماض وتلقي العلاج القلوي. بالإضافة إلى ذلك، تم تحليل ستة الكلى السيطرة. تم إجراء تحليل كامل لتسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) لجميع الخزعات [19]. تمت الموافقة على الدراسات البشرية

قدمت جميع المواد موافقة خطية مستنيرة من قبل لجنة الأخلاقيات في كانتون زيوريخ.




بيانات المسالك البولية والبلازما

تم قياس الكرياتينين البولية واليوريا والمغنيسيوم والكالسيوم والصوديوم والبوتاسيوم والبروتين الكلي والأمونيوم والكرياتينين واليوريا في البلازما باستخدام نظام UniCel ® SYNCHRON ® DxC 800 Synchron Clinical System (Beckman Coulter). تم قياس NGAL البولية (Lipocalin-2)، والبطانة البولية 1، والألدوستيرون البولي والبلازما باستخدام مجموعات ELISA باتباع توصيات الشركات المصنعة بدقة (على التوالي، Mouse Lipocalin-2/NGAL، Cat




رقم MLCN20، وEndothelin-1 Quantikine ELISA Kit، DET100، كلا من أنظمة البحث والتطوير، MN، الولايات المتحدة الأمريكية، ومجموعة Aldosterone ELISA، ADI-900-173، Enzo Life Sciences). تم قياس درجة الحموضة في الدم والبيكربونات واليوريا والصوديوم والكلوريد باستخدام نظام تحليل الدم epoc (سيمنز، سويسرا) باستخدام ∼ 100 ميكرولتر من الدم الذي تم جمعه من الضفيرة المدارية الرجعية.

علم الانسجة

تم غمر نصف الكلى في بارافورمالدهيد 4٪ (PFA في PBS) في درجة حرارة الغرفة طوال الليل ودمجها في البارافين أو درجة حرارة القطع المثالية (OCT، Cellpath، UK). تم تحضير أقسام الكلى وصبغها بالهيماتوكسيلين والأيوسين (H&E) وفان جيسون وفقًا للبروتوكولات القياسية. تم توفير التضمين والتلطيخ كخدمة من قبل مختبر علم أمراض النماذج الحيوانية (LAMP، Vetsuisse، جامعة زيورخ).

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



تم اكتشاف الترسب البلوري من خلال صور المقاطع الكلوية الملطخة بـ H&E (بسمك 3 مم) التي تم الحصول عليها تحت الضوء المستقطب (Leica DMI6000، تكبير 20 × ) وتم تجميعها معًا لإنشاء صورة كلية كاملة. في ImageJ، تم تحويل صور الكلى بأكملها إلى RGB وتم اختيار الكلى يدويًا عند حدود القسم (باستثناء الحليمة والمصنوعات اليدوية داخل الأنسجة). تمت إزالة المناطق غير المحددة، وتم تحويل الصورة إلى 8 بت، وتم تعيين عتبة للمنطقة المحددة لعزل البلورات باستخدام ماكرو تم تطويره داخليًا.

تم تصدير قياسات المنطقة المحددة (المساحة الإجمالية) والمساحة التي تحتوي على بلورات واستخدمت لحساب وفرة البلورات النسبية (مساحة البلورة/المساحة الإجمالية).

تم إجراء التسجيل النسيجي باستخدام نفس صور H&E المستخدمة للكشف عن الترسب البلوري. تم إجراء التحليل بطريقة عمياء من قبل أخصائي أمراض الكلى ذو الخبرة (كيرستين أمان) باستخدام نظام تسجيل شبه كمي لتصلب الكبيبات (النتيجة 0-3)، والإصابة الأنبوبية الحادة (النتيجة 0-3)، والتليف الخلالي والضمور الأنبوبي (IFTA في %) ووجود (1) أو غياب (0) الالتهاب الخلالي وبلورات الأكسالات داخل الأنبوب [20].

تحليل لطخة غربية

تم استخراج الكلى اليسرى من الفئران المخدرة بالإيزوفلورين، وتم تجميدها بسرعة في النيتروجين السائل وحفظها عند درجة حرارة -80 درجة مئوية حتى استخراج البروتين. تم تحلل الكلى وتجانسها في محلول بارد مثلج يحتوي على 300 ملي مولار مانيتول، 5 ملي مولار EGTA، 12 ملي مولار تريس، درجة الحموضة 7.1 مع أقراص كوكتيل مثبط الأنزيم البروتيني (قرص واحد / 10 مل من المحلول، صغير كامل)

خالية من EDTA، شركة Roche Diagnostics GmbH، مانهايم، ألمانيا). تم قياس تركيز البروتين الكلي بواسطة طريقة ربط صبغ برادفورد المعدلة (Bio-Rad، Hercules، CA، USA) وتم إذابة البروتينات في المخزن المؤقت لعينة Laemmli. تم تحميل المواد الهلامية بـ 30 ميكروغرام من محلول الكلى الكلي وتم إجراء النشاف الغربي كما هو موضح سابقًا [21]. كانت الأجسام المضادة الأولية هي: الفأر المضاد لـ Vimentin (1: 2000، MAS-11883، Invitrogen، Maryland، USA)، anti- α SMA للأرنب (1: 1000، ab5694، Abcam، Cambridge، UK)، الفئران المضادة لـ Klotho. (1:1000، KO603، Transgenic Inc، كوبي،

اليابان)، و β -tubulin (1: 25000، سيجما، الولايات المتحدة الأمريكية). إذا لزم الأمر، تعرضت الأغشية لتجريد خفيف في 0.2 م

جليكاين، 0.1% SDS، درجة الحموضة 2.2 مرتين لمدة 20 دقيقة ويتم غسلها باستخدام TBS قبل الحجب وإعادة التكاثر.

تسلسل الحمض النووي الريبي

إعداد المكتبة

تم تحديد جودة الحمض النووي الريبي (RNA) المعزول باستخدام مقياس التألق Qubit ® (1.0) (Life Technologies، كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) والمحلل الحيوي 2100 (Agilent، Waldbronn، ألمانيا). فقط تلك العينات التي تبلغ نسبة 260 نانومتر/280 نانومتر بين 1.8 و2.1 ونسبة 28S/18S بين 1.5 و2 تمت معالجتها بشكل أكبر. تم استخدام TruSeq RNA Sample Prep Kit v2 (Illumina، Inc، California، USA) في الخطوات التالية. باختصار، تم إثراء إجمالي عينات الحمض النووي الريبي (100-1000 نانوغرام) بالبولي-أ ثم نسخها عكسيًا إلى [كدنا] مزدوج الجديلة. تم تجزئة عينات [كدنا] وإصلاحها نهائيًا ومتعددة الأدينيلات قبل ربط محولات TruSeq. تم إثراء المحولات التي تحتوي على فهرس أجزاء تعدد الإرسال بشكل انتقائي باستخدام PCR. تم التحقق من صحة جودة وكمية المكتبات المخصبة باستخدام Qubit ® (1.0) Fluorometer و Caliper GX LabChip ® GX (Caliper Life Sciences، Inc.، USA). المنتج عبارة عن مسحة يبلغ متوسط ​​حجم القطعة فيها حوالي 260 نقطة أساس. تم تطبيع المكتبات إلى 10 نانومتر في Tris-Cl 10 ملم، ودرجة الحموضة 8.5 مع 0.1٪ توين 20.

توليد الكتلة والتسلسل

تم استخدام TruSeq PE Cluster Kit HS4000 أو TruSeq SR Cluster Kit NovaSeq6000 (Illumina، Inc، California، USA) لتوليد الكتلة باستخدام 10 مساءً من المكتبات المجمعة المجمعة على cBOT. تم إجراء التسلسل على Illumina NovaSeq 6000 أحادي الطرف 100 نقطة أساس باستخدام TruSeq SBS Kit NovaSeq6000 (Illumina، Inc، California، USA).

تحليل البيانات

تم فحص جودة القراءات باستخدام FastQC. تمت إزالة محولات التسلسل باستخدام Trimmomatic [22] وتم تقليم القراءات بشدة بواسطة خمس قواعد في النهاية 3 .. على التوالي، يقرأ ما لا يقل عن 20 قاعدة طويلة، وبمتوسط ​​إجمالي لدرجة الدكتوراه




تمت محاذاة نقاط الجودة الأكبر من 10 إلى الجينوم المرجعي والنسخة النصية لـ Mus musculus (ملفات FASTA وGTF، على التوالي، تم تنزيلها من GRCm38.p5، الإصدار 91) مع STAR v2.7.1 [23] مع الإعدادات الافتراضية للقراءات ذات النهاية الفردية.

تم قياس توزيع القراءات عبر التعبير الإسوي الجينومي باستخدام حزمة R GenomicRanges

من الموصل الحيوي الإصدار 3.10. تم تحديد الجينات المعبر عنها تفاضليًا (DE) باستخدام حزمة R edgeR


من الموصل الحيوي الإصدار 3.10.

يتم تمييز الجين على أنه DE إذا كان يمتلك الخصائص التالية:




ما لا يقل عن عشرة أعداد في نصف العينات على الأقل في مجموعة واحدة.


ف ≥ 0.05.

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022




log2 (تغيير الطية) ≥ 0.5 أو ≥ - 0.5.




يتم بعد ذلك استخدام جينات DE كمدخل لتحليل المسار المستند إلى علم الجينات (GO) باستخدام حزمة R goseq [26] أو أداة تحليل التخصيب GO [27].




في الوقت الحقيقي شبه الكمي RT-PCR

تم استخراج إجمالي الحمض النووي الريبي (RNA) من ∼ 30 ملغ من أنسجة الكلى باستخدام مجموعة NucleoSpin RNA (Macherey-Nagel، Du¨ren، Germany) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم إجراء النسخ العكسي باستخدام TaqMan Reverse Transcription Kit (Applied Biosystems، Forster City، CA، USA). تم تخفيف إجمالي 300 نانوغرام من الحمض النووي الريبي (RNA) في مزيج تفاعل سعة 20 ميكرولتر يحتوي على: المخزن المؤقت RT (1 × )، MgCl 2 (5.5 مم)، السداسيات العشوائية (2.5 ميكرومتر )، مثبط RNAse (0.4 U ميكرولتر - 1 ) ) ، إنزيم النسخ العكسي متعدد النسخ (1.25 U μ l - 1 )، مزيج deoxyNTP (500 ميكرومتر لكل منهما)، والمياه الخالية من الحمض النووي الريبي (RNA). تم إجراء PCR في الوقت الحقيقي شبه الكمي على QuantStudio 6 Pro (Applied Biosystems، Forster City،

كاليفورنيا، الولايات المتحدة الأمريكية) باستخدام PowerUp ™ SYBR ® Green Master Mix (Applied Biosystems، فيلنيوس، ليتوانيا) وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة. تم حساب التعبير عن الجينات محل الاهتمام فيما يتعلق بترانسفيراز هيبوكسانثين جوانين فسفوريبوسيل (HPRT). تم حساب مستويات mRNA النسبية كـ R = 2ˆ#x2212 ( C t، الجين المستهدف -

C t، جينات التحكم الداخلي ).

كانت التسلسلات التمهيدية هي: Cyp4a14 ، Forward (Fw): 5 ′ GACGTTTGTCCCACCATGCC 3 ′ ، عكس (Rv): 5 ′ TGGC- CTTCTGCAGCTCTTCC 3 ′ ؛ Nr4a3 ، Fw: 5 ′ AGCTGGGCAGAAAAGATCCC 3 ′ ، Rv: 5 ′ CCCAAATCCTCGAAG- GCACT 3 ′ ؛ Hspa1b ، Fw: 5 ′ CACCATCGAGGAGTGGATT 3 ′ ، Rv: 5 ′ CTTGACAGTAATCGGTGCCCA 3 ′ ؛ عامل التخثر II ( F2 )، Fw: 5 ′ ATGGGGTGAAGGATGTGACC 3 ′ ، Rv: 5 ′ GTAGGTCCTTTACCCACCCAC 3 ′ ؛ Ces1g , Fw: 5 ′ GGAGGCCCAGTCATGTTTTGA 3 ′ , Rv: 5 ′ TTGTGTCCCACTGGTGTCAG 3 ′ ; Col6a6 , Fw: 5 ′ CCACTGC- CTCCACTGACATT 3 ′ , Rv: 5 ′ TGAAATCCAGAGGCACAAATCT 3 ′ .




قياس التدفق الخلوي وعزل الخلايا الكلوية





تم حصاد الكلى اليمنى من الفئران تخدير الأيزوفلورين، مقطعة إلى ثلاث قطع، ووضعها على الفور في برنامج تلفزيوني المثلج. تم إجراء عزل الخلايا المناعية من الكلى باستخدام نسخة معدلة من البروتوكول الذي نشره Nistala et al. [28]. تم تحقيق الهضم عن طريق وضع أنسجة الكلى في أنبوب C لطيفMACS مع وسط RPMI سعة 3 مل يحتوي على 10٪ من مصل عجل الجنين (FCS)، وDNase I (200 ميكروغرام / مل، VWR) وCollagenase I (2.4 مجم / مل، Gibco) ، وفصلها باستخدام GentleMACS (Miltenyi) وفقًا لبروتوكول الشركة المصنعة (الرئة 1 والرئة 2). تمت إزالة حطام الخلايا المتبقية باستخدام مصفاة خلايا 100 ميكرومتر وتم التخلص من خلايا الدم الحمراء باستخدام المخزن المؤقت ACK (155 مم NH 4 Cl، 10 مم KHCO 3 ، 0.1 مم Na 2 EDTA، درجة الحموضة 7.4) لمدة 3 دقائق عند درجة حرارة الغرفة.

تم الحصول على الكريات البيض عن طريق فصل التدرج الكثافة. باختصار، تمت إعادة تعليق الحبيبة في 0.25 مولار سكروز، وتم خلطها بنسبة 1:1 مع 72% من Percoll (GE Healthcare) ومغطاة بمحلول Percoll 72%. تم حصاد الكريات البيض من الطور البيني الأبيض وملطخة لقياس التدفق الخلوي. كانت ملطخة تعليق خلية واحدة خارج الخلية مع الأجسام المضادة المسمى الفلورسنت في المخزن المؤقت FACS (2٪ FCS، 5 ملم EDTA، 0.05٪ NaN 3 في برنامج تلفزيوني) لمدة 20 دقيقة عند RT في الظلام، ثابتة مع حل تثبيت / نفاذية BD (العلوم البيولوجية BD) ل 10 دقائق عند RT وتم الحصول عليها باستخدام BD LSRFortessa (BD Biosciences). تم تحليل البيانات باستخدام برنامج FlowJo (TreeStar).

الأجسام المضادة ذات العلامات الفلورية ضد الفئران MHC-II-Pacific Blue (M5/114.15.2)، CD3-FITC (17A2)، CD4-APC (RM4-5)، CD8a-PE (53-6.7)، CD11b-Alexa Fluor 594 ( M1/70)، CD11c-PerCP (N418)، F4/80-PE-Cy7

(BM8)، Ly-6G-Brilliant Violet 785 (1A8)، وLy-6C-Brilliant Violet 711 (HK1.4)، تم شراؤها من BioLegend. تم استخدام صبغة الخلايا الميتة الحية / الميتة القابلة للإصلاح بالقرب من الأشعة تحت الحمراء (Invitrogen) لاستبعاد الخلايا الميتة.




تحليل احصائي

وتظهر البيانات على أنها تعني - + الانحراف المعياري (SD). تم إجراء مقارنات القيم من ثلاث مجموعات أو أكثر باستخدام ANOVA أحادي أو ثنائي الاتجاه متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق. تم إجراء المقارنة بين مجموعتين باستخدام اختبار الطالب غير المقيَّم ثنائي الذيل . واعتبرت النتائج ذات دلالة إحصائية عند P < 0.05. ستا-

تم إجراء التحليلات الفنية باستخدام R [29] (إصدار Rstudio 1.4.1103) أو GraphPad Prism 8.2.1 (برنامج GraphPad

شركة.). تم وصف التحليل الإحصائي لبيانات تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) في القسم الفرعي "تسلسل الحمض النووي الريبي (قسم المواد والطرق)". تم تحديد الحد الأدنى لحجم العينة مسبقًا من خلال تحليل الطاقة ( ن = 12 للمجموعات غير المعالجة والعلاجية في ثلاث تجارب مستقلة على الأقل). تم إجراء تجارب تهدف إلى مقارنة كمية كلوريد الصوديوم مع NaHCO 3 في اعتلال الكلية البلوري مع n = 8 (انظر القسم الفرعي حول "اعتلال الكلية بالأكسالات والعلاج بالقلويات" للحصول على مزيد من التفاصيل حول حجم عينة هذه التجربة). لم يتم استبعاد القيم المتطرفة.




تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



نتائج

العلاجات القلوية الوقائية والعلاجية تحمي وظائف الكلى في اعتلال الكلية البلوري الفأري

تم إحداث اعتلال الكلية البلوري عن طريق تغذية الفئران بأكسالات، وتم إعطاء العلاج القلوي إما كمكملات NaHCO 3 وقائية أو علاجية. تلقت مجموعة واحدة الماء دون إضافة بيكربونات (المجموعة غير المعالجة) (الشكل 1A). اعتلال الكلية البلوري اختلال وظائف الكلى كما هو موضح من خلال ارتفاع اليوريا والكرياتينين في البلازما وانخفاض تصفية اليوريا والكرياتينين (الشكل 1B – E). وشملت التغييرات الإضافية في المعلمات البولية فرط مغنيزيوم البول وفرط كالسيوم البول، ولكن لم يكن هناك تغيير في إفراز الصوديوم (الشكل 1F-H). تم تقليل إفراز الأمونيوم في اليوم الرابع من التعرض لنظام الأكسالات الغذائي ولكنه عاد إلى المستويات الطبيعية في المجموعة غير المعالجة بحلول اليوم الرابع من الشفاء (الشكل التكميلي S1A، B والشكل 1I).

منع العلاج القلوي الوقائي كل هذه التغييرات، وانخفض إفراز الأمونيوم إلى ما دون مستويات التحكم، وارتفع إفراز الصوديوم استجابة لارتفاع تناول الصوديوم (الشكل 1B-I). والأهم من ذلك، أن العلاج العلاجي أنقذ وظائف الكلى في مجموعة اعتلال الكلية بينما لم يكن له أي آثار في الحيوانات السليمة (الشكل 1B – E). وبالمثل، أدى العلاج القلوي إلى تطبيع إفراز الكالسيوم والمغنيسيوم في البول في جميع الفئران المعالجة (الشكل 1F، G) وزيادة إفراز الصوديوم (الشكل 1H). بالإضافة إلى ذلك، أدى كلا بروتوكولي العلاج القلوي إلى رفع درجة حموضة البول بشكل فعال، في حين أظهرت الفئران غير المعالجة بالأكسالات بولًا أكثر حمضية في بداية ونهاية مرحلة التعافي (الشكل التكميلي S1C-E). تسبب العلاج العلاجي في فقدان عابر لوزن الجسم، والذي تم إرجاعه بالكامل بنهاية فترة العلاج (الشكل التكميلي S1F).

بالإضافة إلى ذلك، قمنا بتكرار هذه التجارب باستبدال ماء الصنبور بـ 0.2 مولار كلوريد الصوديوم لتمييز ما إذا كانت التأثيرات الإيجابية التي يوفرها العلاج القلوي نشأت من حمل البيكربونات أو الصوديوم. أظهرت الفئران التي تعاني من اعتلال الكلية بالأكسالات والتي تعرضت لـ 0.2 م كلوريد الصوديوم احماض الدم، وفرط صوديوم الدم، وفرط كلور الدم، وزيادة وزن الكلى، والاتجاه نحو بروتين البول، وانخفاض حاد في تصفية اليوريا والكرياتينين (الشكل التكميلي S2A – H). العلاج القلوي يمنع أو يخفف من تلك التغييرات. في مجموعة الحيوانات المحملة بكلوريد الصوديوم، كان لا بد من قتل حيوانين قبل نهاية التجربة (الشكل التكميلي S2I). لذلك، قدم العلاج القلوي فوائده ليس لأنه، ولكن على الرغم من حمل الصوديوم المرتبط به، وتم إجراء جميع التجارب الإضافية فقط على الحيوانات المعالجة بماء الصنبور أو العلاج القلوي ما لم ينص على خلاف ذلك.

تم رفع علامة إصابة الكلى NGAL بواسطة اعتلال الكلية البلوري في الفئران غير المعالجة (الشكل 2A). في اليوم الرابع من تحريض اعتلال الكلية البلوري، كانت قيم NGAL أعلى بحوالي 19 مرة وظلت كذلك حتى اليوم الرابع من الشفاء. وفي يوم التعافي الثامن والعشرين ، كان معدل NGAL أعلى بأربع مرات فقط مقارنة بالمجموعة الضابطة المعنية. تم منع ارتفاع NGAL بشكل كبير عن طريق العلاج الوقائي، ولم يظهر سوى زيادة عابرة أثناء التحريض وفي بداية مرحلة الشفاء قبل أن يعود إلى طبيعته بنهاية العلاج. كان إفراز NGAL مشابهًا جدًا بين الفئران المعالجة علاجيًا وغير المعالجة (الشكل 2A).

تسبب النظام الغذائي للأوكسالات في الفئران غير المعالجة في حدوث تغييرات هيكلية عميقة في الكلى. تم تخفيض وزن الكلى في المتوسط ​​بنسبة 23.3 − + 4٪ ( ن = 8 / مجموعة، P < 0.05) وأظهر تقييم التشريح المرضي أن اعتلال الكلية البلوري في الفئران غير المعالجة تسبب في إصابة أنبوبية كلوية حادة، وضمور أنبوبي وتليف، والتهاب خلالي (الشكل

2 ب – ه). أصيب خمسون بالمائة من هذه الفئران بتصلب الكبيبات (الشكل 2F). أظهر القياس الكمي الإضافي للتليف بواسطة تلطيخ فان جيسون تراكم الكولاجين في أنسجة الكلى عن طريق اعتلال الكلية البلوري (الشكل التكميلي S3A، E، F). تسبب العلاج العلاجي في اختلافات طفيفة في درجات التشريح المرضي، مع اتجاه نحو تقليل الضمور الأنبوبي والتليف ومع وجود عدد أقل من الفئران التي تعاني من الالتهاب الخلالي (الشكل 2B-F).

يبدأ الترسب البلوري في الالتهاب الخلالي والتليف [30] ويقترح القياس الكمي بواسطة الفحص المجهري للضوء المستقطب انخفاضًا في الترسب البلوري في الحيوانات التي تخضع للعلاج القلوي بنهاية مرحلة التعافي

(الشكل التكميلي S3B، G). ومع ذلك، في يوم التعافي الثامن والعشرين ، أظهرت الفئران غير المعالجة انخفاضًا كبيرًا في محتوى البلورات الكلوية مقارنةً باليوم الرابع من التعافي (1.75 - + 1.42٪ من الحمة الكلوية مقابل 0.37 + - 0.23٪،



(أ)











(أ)









(ب)





(ب)




150




اليوريا البلازما

*** ***

***







*

(ج)



(ج)





الكرياتينين في البلازما (ملجم/ديسيلتر)



0.3




كرياتينين البلازما

(د)



(د)



*** ***

** *











8




تصفية اليوريا




اليوريا البلازما (ملغ / ديسيلتر)



100




50




0




السيطرة على الأكسالات

تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.0002




نظام عذائي

ع <0.0001




العلاج ف <0.0001




0.2




0.1




0.0




السيطرة على الأكسالات

تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.0006




نظام عذائي

ع <0.0001




العلاج ع = 0.0164




6




 لتر/دقيقة/أبيض وأسود (جم)



4




2




0

السيطرة على الأكسالات




تحليل التباين ثنائي الاتجاه




*







تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



التفاعل ع = 0.087




نظام عذائي

ع = 0.035




العلاج ع = 0.064






(و)



(و)



تنقية الدم من الكرياتنين

(F)




إفراز المغنيسيوم

**

** *







*

(ز)




إفراز الكالسيوم




*

*







40




تحليل التباين ثنائي الاتجاه

 لتر/دقيقة/أبيض وأسود (جم)



30

التفاعل ع = 0.1252

20

نظام عذائي

ع = 0.0230

10

العلاج ع = 0.0348

0



(F)





0.20




ملغ 2+ (ملغ / 24 ساعة)



0.15




0.10




0.05




0.00

**

*




تحليل التباين ثنائي الاتجاه




التفاعل ع = 0.141




نظام عذائي

ع = 0.007




العلاج ف <0.001



(ز)





0.5




كا 2+ (مجم/24 ساعة)



0.4




0.3




0.2




0.1




0.0

** ***




**







تحليل التباين ثنائي الاتجاه




التفاعل ع = 0.008




نظام عذائي

ع = 0.033




العلاج ف <0.001

السيطرة على الأكسالات

السيطرة على الأكسالات

السيطرة على الأكسالات



(ح)





(ح)




إفراز الصوديوم

(أنا)




إفراز الأمونيوم
(أنا)



*

*** ***









* ***

20




1.0

***

***




نا 2+ (مليمول / 24 ساعة)



15




10




5




0

السيطرة على الأكسالات




تحليل التباين ثنائي الاتجاه




التفاعل ع <0.001




نظام عذائي

ع = 0.042




العلاج ف <0.001




0.8




NH 4 + (مجم/24 ساعة)



0.6




0.4




0.2




0.0




***

***







السيطرة على الأكسالات




تحليل التباين ثنائي الاتجاه










التفاعل ع = 0.452




نظام عذائي

ع = 0.165




العلاج ف <0.001




الشكل 1. العلاجات القلوية الوقائية والعلاجية تحمي وظائف الكلى في اعتلال الكلية البلوري

تم إطعام الفئران C57BL/6 التي خضعت لنظام غذائي خالٍ من الكالسيوم لمدة 10 أيام يحتوي على 0.67٪ أكسالات (تحريض اعتلال الكلية البلوري) أو نظام غذائي خالٍ من الكالسيوم (تحريض التحكم) بعد ذلك بنظام غذائي قياسي لمدة 28 يومًا (فترة التعافي). عولجت الفئران بـ 0.2 مولار NaHCO 3 في الماء خلال فترة الحث والتعافي بأكملها (العلاج الوقائي)، فقط خلال فترة التعافي (العلاج القلوي العلاجي) أو بماء الصنبور (المجموعة غير المعالجة). (B–I) تم جمع البلازما والبول في اليوم الثامن والعشرين من الشفاء واليوريا في البلازما


تم قياس/حساب الكرياتينين (C)، وإزالة اليوريا (D) والكرياتينين (E)، وإفراز المغنيسيوم (F)، والكالسيوم (G)، والصوديوم (H)، والأمونيوم (I) على مدار 24 ساعة. الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = علاج علاجي، المثلثات الزرقاء = علاج وقائي. تم حساب ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق،

* P < 0.05، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 7–8 / مجموعة باستثناء مجموعات العلاج القلوي الوقائي التي لديها n = 4.






P = 0.017، n = 8، الشكل التكميلي S4)، مما يدل على أنه تمت إزالة معظم البلورات خلال فترة 4 أسابيع بشكل مستقل عن العلاج القلوي. الأهم من ذلك، أظهرت الحيوانات المعالجة علاجيًا مستويات أعلى من تصفية اليوريا والكرياتينين مقارنة بالحيوانات غير المعالجة، عند مقارنة تلك الفئران بدرجات مماثلة من IFTA (الشكل 2G، H).

وبالمثل، عند تخطيط المحتوى البلوري مقابل تصفية اليوريا أو الكرياتينين، كانت تلك الحيوانات ذات المحتوى البلوري المماثل تتمتع بوظيفة كلى أفضل بعد العلاج بالعلاج القلوي (الشكل التكميلي S3C، D). مجتمعة، هؤلاء




(أ)



(ب)







(أ) (ب)

NGAL البولية في 24 ساعة




اليوم الرابع اليوم الرابع اليوم الثامن والعشرون اليوم الرابع اليوم الرابع اليوم الثامن والعشرون

الانتعاش التعريفي الانتعاش التعريفي الانتعاش

***

***

***

***




###

###

يتحكم

أكسالات







الوزن النسبي (٪)



5000




4000




(ج)





0.016




0.014




0.012




0.010




0.008




***

**

*** **







وزن الكلى النسبي







إصابة أنبوبية حادة










4




النتيجة (0-3)



3




2




1




(و)



NGAL (من/24 ساعة)



3000




(د)











0.006




السيطرة على الأكسالات




التليف الخلالي والضمور الأنبوبي (IFTA)










0

السيطرة على الأكسالات






الالتهاب الخلالي

2000




1000




0

40










المنطقة المتضررة (%)



30




20




10




0

السيطرة على الأكسالات

1.5




حضور (0) أو غياب (1)



1.0




0.5




0.0










تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



السيطرة على الأكسالات













العلاج الوقائي غير المعالج




(F)











2.5




النتيجة (0-3)



2.0




1.5




1.0




0.5




تصلب الكبيبات




(ز)





40




الإفتا (%)



30




20




10

IFTA x تصفية اليوريا (اعتلال الكلية بالأكسالات فقط)




(ح)







40




الإفتا (%)



30




20




10

IFTA x تصفية الكرياتينين (اعتلال الكلية بالأكسالات فقط)




0.0




السيطرة على الأكسالات




0

0 50 100 150 200

تصفية اليوريا (  لتر/دقيقة)




0



02004006008001000

تصفية الكرياتينين (  لتر/دقيقة)




الشكل 2. يلعب العلاج القلوي دورًا ثانويًا في حماية الإصابة الكلوية والتغيرات المورفولوجية في الكلى

(أ) إفراز NGAL لمدة أربع وعشرين ساعة في اليوم الرابع من تحريض اعتلال الكلية، واليوم الرابع والثامن والعشرين من الشفاء. (ب) وزن الكلى بالنسبة لوزن الجسم. (C – F) التقييم المورفولوجي لأنسجة الكلى للإصابة الأنبوبية الحادة (C)، IFTA (D)، الالتهاب الخلالي (E)، تصلب الكبيبات (F). تآمر IFTA ضد اليوريا (G) وتصفية الكرياتينين (H). الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = علاج علاجي، المثلثات الزرقاء = علاج وقائي. تم حساب ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق، ** P < 0.01، *** P < 0.001 مقابل مجموعات التحكم المعنية، ### P < 0.001 مقابل المجموعة غير المعالجة المعنية s، n = 7–8/مجموعة باستثناء مجموعات العلاج القلوي الوقائي التي لديها n = 4.









تشير البيانات إلى أن العلاج بالقلويات ينقذ وظائف الكلى من خلال آليات تتجاوز الحد من ترسب البلورات والتليف والتلف الأنبوبي الخلالي.

نظرًا لأن الحيوانات المعالجة وقائيًا أظهرت حماية كاملة تقريبًا ضد اعتلال الكلية بالأكسالات، ويرجع ذلك على الأرجح إلى ارتفاع قابلية ذوبان بلورات الأكسالات في بيئة قلوية، فقد ركزنا تحقيقاتنا الإضافية على الحيوانات غير المعالجة والمعالجة علاجيًا لتحديد المسارات المعدلة بالقلويات.

على الرغم من تشابه مستويات التليف الكلوي النسيجي بين مجموعتي اعتلال الكلية، أظهرت العلامات الجزيئية للتليف اختلافات واضحة بين المجموعتين. أدى اعتلال الكلية البلوري إلى زيادة وفرة البروتين في الفيمنتين، والتي تم تخفيفها عن طريق العلاج العلاجي (الشكل 3A). من ناحية أخرى، كانت وفرة α SMA مرتفعة في الفئران المعالجة علاجيا، مع عدم وجود تغيير في الحيوانات غير المعالجة (الشكل 3B). أظهر تحليل النسخ للكلى بأكملها أنماطًا مماثلة لكلا العلامتين، مع انخفاض في Vim mRNA، ولكن لا يوجد تغيير في مستويات aSMA ( Acta2 ) mRNA (الشكل 3C، D). لمزيد من تشريح دور العلاج القلوي في التليف، استخدمنا علامات محددة لمجموعات سكانية مختلفة من الخلايا الليفية والخلايا الليفية العضلية التي تم تحديدها مؤخرًا بواسطة Kuppe et al. [31]. كانت العلامات (بعد التسميات التي وضعها Kuppe وآخرون لكل مجموعة سكانية فرعية): Scara5 (الخلايا الليفية 1)، Ogn و Col14a1 (الخلايا الليفية العضلية 2)، Nkd2 (الخلايا الليفية العضلية 1 أ)، Grem2 (الخلايا الليفية العضلية 1 ب)، Frzb (الخلايا الليفية العضلية 3 ب) (الشكل 4A ) -F). اعتلال الكلية البلوري - ارتفاع علامات الخلايا الليفية العضلية 2 و1أ و1ب، مع تأثير مخفض طفيف على 3ب، وعدم وجود تأثير على الخلايا الليفية

1. رفع العلاج القلوي Scara5 وتسبب في اتجاه نحو انخفاض Nkd2 في الفئران المصابة باعتلال الكلية. من أجل فهم كيف يمكن ربط هذه العلامات بـ Vim و Acta2 ، قمنا برسمها مقابل التعبير عن علامات الخلايا الليفية (myo) (الشكل 4G – L). ترتبط مستويات Acta2 mRNA خطيًا مع علامات الأرومة الليفية العضلية 2 ( Ogn ، R 2 غير المعالج = 0.82 والعلاجي R 2 = 0.94؛ Col14a1 ، R 2 غير المعالج = 0.81 والعلاجي R 2 = 0.81)، بينما يرتبط Vim بعلامة الأرومة الليفية العضلية 1a Nkd2 (غير المعالجة) ، ر 2 = 0.98، علاجي، ر 2 = 0.94). علامات التليف الأخرى، مثل فيبرونكتين 1 ( Fn1 ، R 2 غير المعالج = 0.99، R 2 العلاجي = 0.96) و Col1a1 (R 2 غير المعالج = 0.99، R 2 = 0.96) و Col1a1 (R 2 غير المعالج = 0.99).




(أ)

لماذا

(ب)

α-SMA











(أ)


(ب)









فيمينتين ( فيم )

 -SMA (Acta2)




***

**







*







6 4

تطبيع الفيمنتين/  -توبولين



تطبيع

 -SMA/  -توبولين



تحليل التباين ثنائي الاتجاه 3

4

تفاعل

ع = 0.003 2

2 النظام الغذائي

ع <0.001 1

العلاج ع = 0.020

يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



0 0




تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.223




نظام عذائي

ع = 0.002




العلاج ع = 0.017



(ج)


(د)







(ج) (د)

فيم مرنا




Acta2 مرنا

*** ***

***



التهم تطبيع



15000




10000

5000




***

**













التهم تطبيع



4000




3000







5000

2000




1000




يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



0 0




الشكل 3. آثار العلاج القلوي على علامات التليف

(أ) بروتين فيمينتين. (ب) بروتين α SMA. تم إجراء النشاف الغربي باستخدام 30 ميكروغرام من مجموع الكلى المتجانس لكل حارة في هلام SDS/PAGE. (ج) فيم مرنا. (د) Acta2 مرنا. تم تحديد مستويات mRNA بواسطة تسلسل الحمض النووي الريبي (RNAseq) باستخدام الحمض النووي الريبي الكامل للكلية. الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = العلاج العلاجي. بالنسبة لبيانات البروتين، تم حساب ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق، * P < 0.05، ** P < 0.01، *** P < 0.001. ن = 7-8 / مجموعة. جينات RNAseq DE: تغيير الطية ≥ 0.5، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 5 / مجموعة.









تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



0.99، العلاجية R 2 = 0.97) ترتبط أيضًا بـ Vim . من ناحية أخرى، يرتبط Vim بشكل سيئ بـ Ogn ( Fn1 ، R2 غير المعالج = 0.81 ، R العلاجي 2 = 0.70)، بينما لم يرتبط كل من Acta2 وVim بمستويات Scara5 . تشير هذه الارتباطات الإيجابية القوية إلى أن هذه المجموعات السكانية الفرعية قد تساهم في إنتاج مصفوفة خارج الخلية في اعتلال البلورات. العلاج القلوي أيضًا خاضع للتنظيم Ctgf (الشكل التكميلي S5A). ومع ذلك، لم تتم ملاحظة أي تغييرات بالنسبة للعلامات الأخرى، مثل Col1a1 و Col3a1 وFn1 وTgA 1 وVegfa و Mmp2 (الشكل التكميلي

S5B-G). من بين جينات الكولاجين، تم استرداد تخفيض Col6a6 mRNA بواسطة اعتلال الكلية البلوري عن طريق العلاج القلوي

(الشكل التكميلي S5H). باختصار، لم يقلل العلاج القلوي من تراكم الكولاجين، ولا من التعبير عن علامات المجموعات السكانية الفرعية للخلايا الليفية العضلية المسؤولة عن إنتاج الكولاجين، ولا من معظم علامات التليف. ومع ذلك، يبدو أن العلاج بالقلويات يتفاعل مع المجموعات السكانية الفرعية الإيجابية Scara5 و Nkd2 ومع إنتاج Vimentin. ثبت أن خفض Nkd2 يقلل من التليف [31].



(أ)


(ب)


(ج)





















علاجية غير معالجة







التهم تطبيع



200




150




100




50

Scara5 (الخلايا الليفية 1)




*







التهم تطبيع



1500




1000




500

أوجن (الأرومة الليفية العضلية 2)




**

**







2500




التهم تطبيع



2000




1500




1000




500

Col14a1 (الأرومة الليفية العضلية 2)




0
(د)



السيطرة على الأكسالات




0
(و)



السيطرة على الأكسالات




0
(F)



***

***







تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



السيطرة على الأكسالات

















التهم تطبيع



400




300




200




100




0

Nkd2 (الأرومة الليفية العضلية 1a)




***

***







السيطرة على الأكسالات




500




التهم تطبيع



400




300




200




100




0

Grem2 (الأرومة الليفية العضلية 1ب)




*







السيطرة على الأكسالات




1500




التهم تطبيع



1000




500




0

فرزب (الأرومة الليفية العضلية 3ب)










السيطرة على الأكسالات











(ز)


(ح)


(أنا)













أوجن × اكتا2

Nkd2 × لماذا

نكد2 × فن1



5000

15000

15000




4000




Acta2



3000




لماذا



10000




Fn1



10000




2000




1000




5000




5000




0

050010001500

كل




0

0 100 200 300 400







حجم 2




0

0 100 200 300 400







حجم 2



(ي)

















أوجن × فيم

اكتا2 × سكارا5

فيم × سكارا5
(ك)


(ل)





15000

200

15000







10000

150




10000




لماذا



سكارا5



لماذا



100




5000




5000

50




0

050010001500

كل

0

0 1000 2000 3000 4000 5000

Acta2

0

0 50 100 150 200

سكارا5




الشكل 4. ينظم العلاج القلوي بشكل تفاضلي علامات المجموعات السكانية الفرعية المختلفة للخلايا الليفية العضلية والخلايا الليفية

إشارة تسلسل الحمض النووي الريبي (A) Scara5 (الخلايا الليفية 1)، (B) Ogn (الخلايا الليفية العضلية 2)، (C) Col14a1 (الخلايا الليفية العضلية 2)، (D) Nkd2 (الخلايا الليفية العضلية 1a)، (e) Grem2 (الخلايا الليفية العضلية 1b)، و (F) فرزب (الخلايا الليفية العضلية 3ب). ارتبطت مستويات Acta2 mRNA بشكل إيجابي مع Ogn (G)، و Vim (H)، و Col1a1 (I) ارتبطت بشكل إيجابي مع Nkd2 ، بينما ارتبط Vim (J) بشكل سيئ مع Ogn . لا Acta2 (K) ولا Vim

(L) كانت مرتبطة بـ Scara5 . الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = العلاج القلوي العلاجي. جينات RNAseq DE: أضعاف

التغيير ≥ 0.5، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 5 / مجموعة.






يؤثر اعتلال الكلية البلوري على محور الألدوستيرون والإندوثيلين وإنزيمات الأمونيا بشكل مستقل عن العلاج القلوي

تم اقتراح زيادة مستويات الهرمونات المنتشرة، مثل الألدوستيرون والإندوثيلين، لتلعب دورًا رئيسيًا في التأثيرات المعتمدة على الرقم الهيدروجيني والتي تساهم في تطور مرض الكلى المزمن [32،33] ولكن يبدو أنها لا تلعب دورًا رئيسيًا في نموذجنا. لم يكن مستوى الألدوستيرون البولي في اليومين الرابع والثامن والعشرين من التعافي مرتفعًا في اعتلال الكلية البلوري (الشكل 5 أ، ب). لم تلاحظ أي فروق بين المجموعات المعالجة بالقلويات وغير المعالجة في يوم التعافي الرابع. في اليوم الثامن والعشرين من الشفاء، خفض العلاج القلوي مستويات الألدوستيرون البولية في الحيوانات المراقبة، ولكن لم يلاحظ أي اختلاف بين مجموعات اعتلال الكلية البلوري (الشكل 5ب). وبالمثل، تم تخفيض مستويات الألدوستيرون في البلازما بشكل طفيف عن طريق العلاج القلوي، ولكن دون تغيير عن طريق تحريض اعتلال الكلية (الشكل 5C). وكان التعبير مستقبلات القشرانيات المعدنية Nr3c2 مرنا دون تغيير في جميع المجموعات (الشكل 5D).

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



لم يغير اعتلال الكلية البلوري مستويات الإندوثيلين-1 البولية بينما حفز العلاج القلوي مستويات الإندوثيلين-1 بشكل غير متوقع (الشكل 5E، F). أدى اعتلال الكلية البلوري إلى زيادة تعبير الرنا المرسال الكلوي عن الإندوثيلين-1 ( Edn1 ) ومستقبلات الإندوثيلين Ednra (الشكل 5G، H) و Ednrb . خفف العلاج القلوي ارتفاع Edn1 دون تأثيرات كبيرة على المستقبلات.

أظهرت التجارب التي أجريت على الفئران التي تم استئصال الكلية جزئيًا أن تراكم الأنسجة الكلوية للأمونيوم يمكن أن ينشط المسار البديل الكلوي البديل، والذي يتم مواجهته عن طريق إعطاء البيكربونات [13]. على الجانب الآخر، انخفاض إفراز الأمونيوم في البول هو مؤشر لتطور مرض الكلى المزمن [34]. أدى اعتلال الكلية البلوري إلى تنظيم نصوص Glud1 (Glutamate Dehydrogenase) و Ogdh (Oxoglutarate Dehydrogenase)، والإنزيمات المشاركة في تكوين الأمونيا وتوليد بيكربونات دي نوفو (GEO accession GSE179216). ومع ذلك، لم يتم تغيير Pck1 (PEPCK) و Gls (الجلوتاميناز) في الحيوانات التي تعاني من اعتلال الكلية. العلاج القلوي الخاضع للتنظيم Pck1 mRNA كلاهما مسيطر كما هو الحال في اعتلال الكلية البلوري. تم رفع جينات المسار التكميلي البديل، C3 و Hc (C5) عن طريق اعتلال الكلية البلوري والعلاج القلوي الذي خفف من هذه التعديلات (GEO accession GSE179216).




العلاج القلوي يحمي بروتين كلوثو المضاد للشيخوخة

يمارس α -klotho تأثيرات وقائية على الكلى ويتم تنظيمه في وقت مبكر من تطور مرض الكلى [35،36]. خففت مكملات البيكربونات من الانخفاض في مستويات كلوثو القابلة للذوبان في نموذج CKD [37]. في نموذجنا، تم عكس الانخفاض في مستويات كلوثو مرنا ( Kl ) والبروتين عن طريق اعتلال الكلية البلوري بالكامل تقريبًا عن طريق العلاج القلوي (الشكل 6A-C). في الخلايا البطانية للوريد السري البشري (HUVECs)، والشريان الأورطي الجرذ، والدماغ، يقلل α -klotho من التعبير عن جزيئات التصاق الخلايا البطانية، مثل ICAM1 وVCAM1، مما يؤدي إلى تقليل التصاق الخلايا الوحيدة الالتهابية [38،39]. هنا، تم تخفيف ارتفاع كل من Icam1 و Vcam1 بسبب اعتلال الكلية البلوري بشدة عن طريق العلاج القلوي العلاجي (الشكل 6D، E).




العلاج القلوي يحسن المسارات الالتهابية والتمثيل الغذائي

أجرينا تحليل المسار باستخدام بيانات النسخ الكاملة من أنسجة الكلى الكاملة في حالات التحكم واعتلال الكلية البلوري، مع أو بدون العلاج القلوي العلاجي (التعداد الطبيعي لجميع الجينات في انضمام GEO GSE179216). أدى اعتلال الكلية البلوري إلى تغيير التعبير عن 4923 نسخة مما تسبب في تغييرات كبيرة في العمليات البيولوجية المتعددة والوظائف الجزيئية والمكونات الخلوية (جدول البيانات التكميلي 1 والملحق 1). نسخ اعتلال الكلية البلوري الخاضعة للتنظيم والمرتبطة بعمليات استقلابية متعددة (مثل NAD

عملية التخليق الحيوي، وأكسدة الأحماض الدهنية باستخدام أسيل-CoA ديهيدروجينيز، وعملية استقلاب الدهون)، والأنشطة الناقلة والإنزيمية، وبنية الميتوكوندريا، وغيرها (الملحق التكميلي 1A-C). وعلاوة على ذلك، الكريستال

النسخ المعدلة لاعتلال الكلية والمتضمنة في التصاق الخلايا والالتهابات والعمليات المختلفة ومكونات الخلية المشاركة في إعادة تشكيل الأنسجة، مثل ربط المصفوفة خارج الخلية والإنتغرين والهيبارين والأكتين وغيرها (جدول البيانات التكميلي 1 والملحق 1D-G) ). وإجمالاً، عكس تحليل المسار التغيرات الكبيرة الناجمة عن عمليات تلف الأنسجة وإصلاحها. أثر العلاج القلوي في حد ذاته في الكلى الضابطة على 125 نسخة تنتمي إلى فئات GO المتعلقة بعمليات التمثيل الغذائي (مثل عمليات التمثيل الغذائي للدهون والجلوتاثيون والكوليسترول)، وأثر على التعبير عن الناقلات والجينات التي تتحكم في محتوى الجسيمات الدقيقة في الدم (جدول البيانات التكميلي 1). والملحق 1S-U).

أدى العلاج القلوي في الكلى المصابة باعتلال الكلية إلى تعديل مستويات التعبير لـ 1103 جينات وعكس أو تخفيف خلل التنظيم في 795 نسخة مما يدل على القدرة على تصحيح خلل التنظيم المرضي الذي يفرضه اعتلال الكلية البلوري إلى حد كبير (جداول البيانات التكميلية 1 و 2 ، الشكل 7 أ ، الشكل التكميلي S6) ). من بين الجينات التي يتم تنظيمها عن طريق اعتلال الكلية، تم عكس 616 جينًا كليًا أو جزئيًا وإثرائها في مسارات متميزة بما في ذلك التنظيم الإيجابي لتجمع الوحيدات، والتنظيم الإيجابي لالتصاق خلايا الكريات البيض، والتنظيم الإيجابي لتنشيط الخلايا التائية، والتنظيم الإيجابي لخلايا الكريات البيض المتعددة. العمليات الأخرى المتعلقة بالمناعة مثل التصاق الخلايا، والتسمم الكيميائي، و






(أ)













الألدوستيرون البولي في اليوم الرابع من الشفاء

علاجية غير معالجة




الألدوستيرون البولي في اليوم الثامن والعشرون من الشفاء



(ب)



***

*







**

**













3000 4000







الألدوستيرون (ص / 24 ساعة)



2000




1000




0

السيطرة على الأكسالات
(ج)









الألدوستيرون في البلازما

تحليل التباين ثنائي الاتجاه

التفاعل ع = 0.191

نظام عذائي

ع <0.001

العلاج ع = 0.086




3000




الألدوستيرون (ص / 24 ساعة)



2000




1000




0

السيطرة على الأكسالات
(د)









Nr3c2 مرنا

تحليل التباين ثنائي الاتجاه

التفاعل ع = 0.004

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



نظام عذائي

ع = 0.101

العلاج ف <0.001

الألدوستيرون (جزء من الغرام/مل)



1500




1000




500




0










السيطرة على الأكسالات




تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.998

نظام عذائي

ع = 0.911

العلاج ع = 0.002

800




التهم تطبيع



700




600




500




400










السيطرة على الأكسالات












(و)



إندوثيلين -1 (ص / 24 ساعة)



1.0




0.8




0.6




0.4




0.2




0.0

بطانة الجهاز البولي -1 اليوم الرابع من الشفاء




*** ***







ضد الأكسالات




تحليل التباين ثنائي الاتجاه

التفاعل ع = 0.111

نظام عذائي

ع = 0.005

العلاج ف <0.001






(F)



إندوثيلين -1 (ص / 24 ساعة)



1.5




1.0




0.5




0.0

بطانة الجهاز البولي -1 اليوم الثامن والعشرون من الشفاء




***

**







السيطرة على الأكسالات




تحليل التباين ثنائي الاتجاه

التفاعل ع = 0.942

نظام عذائي

ع = 0.678

العلاج ف <0.001



(ز)









Edn1 مرنا

إدنرا مرنا










500




التهم تطبيع



400




300




200




100

***



(ح)



*** *











التهم تطبيع



400




300




200




100

***




0

السيطرة على الأكسالات

0

***







السيطرة على الأكسالات




الشكل 5. لا يرتفع مستوى الألدوستيرون والإندوثيلين-1 في اعتلال الكلية البلوري ولكنهما يستجيبان للعلاج بالقلويات

الألدوستيرون البولي في اليوم (أ) الرابع و (ب) الثامن والعشرون من الشفاء. (ج) الألدوستيرون البلازما في اليوم الثامن والعشرين من الشفاء. (د) Nr3c2 مرنا (مستقبلات القشرانيات المعدنية). endotelhein-1 البولية في اليوم الرابع والعشرون (E) واليوم الثامن والعشرون من الشفاء. (ز) Edn1 مرنا. (H) Ednra ، مستقبلات الإندوثيلين من النوع A، mRNA. الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = العلاج العلاجي. تم تحليل بيانات ELISA بواسطة ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق، * P < 0.05، ** P < 0.01. n = 7–8/مجموعة لبيانات ELISA و n = 5/مجموعة لبيانات RNAseq. جينات RNAseq DE: تغيير الطية ≥ 0.5، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 5 / مجموعة.









كلوثو














(أ)


(ب)











كلوثو دبليو بي



علاجية غير معالجة





(ج)









تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



في مرنا




**

*







** **



قيمة قياس الكثافة النسبية



2.0 40000




1.5




1.0




0.5




يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



0.0

تحليل التباين ثنائي الاتجاه




التفاعل ع = 0.223




نظام عذائي

ع <0.001




يتحكم



أكسالات



يتحكم



أكسالات



العلاج ع = 0.001

30000




التهم تطبيع



20000




10000




0







8000

Vcam1 مرنا



(د)


(و)



***

*** ***



















3000

Icam1 مرنا

***




***

***







التهم تطبيع



التهم تطبيع



6000

2000

4000

1000

2000




0

السيطرة على الأكسالات

0

السيطرة على الأكسالات




الشكل 6. العلاج القلوي يمنع انخفاض مستويات ألفا كلوثو الكلوية

( أ ) بروتين كلوثو المكتشف بواسطة النشاف الغربي. (ب) قياس الكثافة المناعية لكلوثو. (C) Klotho ( Kl )، (D) Vcam1 ، و (E) مستويات Icam1 مرنا. الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، المربعات الحمراء = العلاج العلاجي. تم تحليل بيانات النشاف الغربي بواسطة ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق، * P < 0.05، ** P < 0.01. ن = 7-8 / مجموعة ل

بيانات النشاف الغربي و n = 5/group لـ RNAseq. جينات RNAseq DE: تغيير الطية ≥ 0.5، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 5 / مجموعة.













تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



الشكل 7. بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) التي توضح فئات GO المخصبة في المجموعات السكانية الفرعية للجينات التي تم تغييرها بواسطة اعتلال الكلية بالأكسالات واستعادتها عن طريق العلاج القلوي

العمليات البيولوجية المنظمة (أ) عن طريق العلاج القلوي. يمثل لون الدوائر معدل الاكتشاف الخاطئ وفقًا للمقياس الموجود على الجانب الأيمن من كل رسم بياني. يمثل حجم الدائرة عدد الجينات الخاضعة للتنظيم في فئة GO معينة. (ب) مؤامرة بركانية تظهر الجينات التي تم اعتبارها أعلى أو أقل تنظيمًا عن طريق العلاج القلوي في مجموعات اعتلال البلورات. تمثل الجينات المسماة العشرة الأوائل من الجينات التي يتم تنظيمها لأعلى ولأسفل والتي تم استعادتها بواسطة العلاج القلوي. تمثل النقاط الحمراء جينات تم تغييرها بشكل كبير عن طريق العلاج القلوي.

تمثل النقاط السوداء جينات غير متغيرة. تمثل النقاط الرمادية الجينات التي لم يتم اكتشافها بواسطة RNAseq مقارنةً بنسخة الفأرة. ن = 5/مجموعة.






تكاثر الخلايا (الشكل التكميلي S6A – C وجداول البيانات 2 و 3). وبالمثل، أعاد العلاج بالقلويات التعبير عن 179 نسخة كانت قد تم تنظيمها بواسطة اعتلال الكلية البلوري. كانت هذه النصوص مرتبطة بشكل شائع باستقلاب الخلية المجمعة في المسارات المشاركة في نقل الغشاء، وعملية استقلاب الأحماض الدهنية، ونشاط الليباز ثلاثي الجليسريد، وارتباط الهيم، ونشاط نقل حمض الكربوكسيل عبر الغشاء، ونشاط هيدرولاز السيرين، ونشاط إنزيم الأكسدة (الشكل 7A، الشكل التكميلي S6D). وجداول البيانات 2 و 3). يتم سرد العشرة الأوائل النصوص التي تم تنظيمها لأعلى ولأسفل والتي تم استردادها بواسطة العلاج القلوي في الجدول 1 وتظهر على قطعة أرض بركان في الشكل 7B. تم أيضًا تقييم الجينات الثلاثة الأولى التي يتم تنظيمها لأعلى ولأسفل بواسطة العلاج القلوي (الجدول 1) بواسطة RT-PCR الكمي (qPCR) للمجموعات المحملة بكلوريد الصوديوم ومجموعات العلاج القلوي المعنية (الشكل التكميلي S7). لقد فشلنا في اكتشاف إشارة لـ F2 ، لكن التنظيم الأعلى لـ Ces1g و Col6a6 والتنظيم السفلي لـ Cyp4a14 كانا مشابهين لتلك التي لوحظت بين العلاج القلوي والفئران غير المعالجة. تم أيضًا تنظيم Hspa1b فيما يتعلق بمجموعة التحكم-NaCl، ولكن شوهد أيضًا انخفاض التنظيم في مجموعة أكسالات-NaCl. على الرغم من الاتجاه نحو خفض التنظيم عن طريق العلاج القلوي في المجموعة الضابطة، لم يلاحظ أي اختلافات كبيرة بين المجموعات ل Nr4a3 .




العلاج القلوي خفض وتيرة الخلايا المساعدة CD4 + T وحيدات الالتهابات الناجمة عن اعتلال الكلية البلوري

كانت نصوص العديد من المركبات الكيميائية المؤيدة للالتهابات من بين الجينات الأكثر تنظيمًا استجابةً للعلاج القلوي، مما يشير إلى أن العلاج القلوي يوقف التسلل (أو التوسع المحلي) لبعض أنواع الخلايا المناعية. قمنا بعزل الخلايا المناعية الكلوية بشكل مباشر وقمنا بقياس الخلايا الوحيدة الالتهابية Ly6G − Ly6G + ، MHCII + F4/80 + البلاعم، MHCII + CD11c + الخلايا الجذعية، CD11b + Ly6G + العدلات، CD3 + CD4 + T الخلايا المساعدة، وCD3 + CD8 + السامة للخلايا. ت

الخلايا بواسطة FACS (الشكل التكميلي S8). نسبة الخلايا التائية والخلايا الجذعية وحيدات الالتهابات التي أثيرت في الكلى البلورية غير المعالجة، في حين منع العلاج القلوي في الغالب الزيادة في وحيدات الالتهابات وخلايا CD3 + T (الشكل 8A – F). بين الخلايا التائية، زادت نسبة خلايا CD4 + T بشكل كبير بسبب اعتلال الكلية البلوري، في حين ظلت نسبة خلايا CD8 + T في الغالب دون تغيير (الشكل 8B). وقد أدى العلاج بالقلويات إلى تثبيط هذه التغيرات بقوة. لم تتأثر البلاعم بشكل كبير باعتلال الكلية البلوري وكانت العدلات نادرة في الأنسجة الكلوية في جميع المجموعات. بالاتفاق، قلل العلاج القلوي من التعبير عن Ccl2 و Ccl5 mRNA، وهما المنظمان الرئيسيان لوفرة الخلايا الوحيدة الالتهابية والخلايا المساعدة CD4 + T، على التوالي (الشكل 8G، H). في المرحلة الحادة من الالتهاب (اليوم الرابع من الشفاء)، جزء من العدلات و




تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



الجدول بالحجم الكامل





معرف الجينات

اسم الجين

قيمة P

روزفلت

أضعاف التغيير


تم التعافي من خلال العلاج القلوي من اعتلال الكلية البلوري (المنخفض)


ENSMUSG00000028715

Cyp4a14

7.408e-06

0.012

- 4.59


ENSMUSG00000028341

Nr4a3

0.000485

0.075

- 3.55


ENSMUSG00000090877

هسبا1ب

6.244e-05

0.034

- 2.96


ENSMUSG00000037868

EGR2

0.0008796

0.096

- 2.93


ENSMUSG00000026628

Atf3

9.886e-05

0.039

- 2.93


ENSMUSG00000029380

Cxcl1

0.000175

0.048

- 2.88


ENSMUSG00000038418

EGR1

0.004489

0.166

- 2.68


ENSMUSG00000033730

EGR3

0.001675

0.118

- 2.51


ENSMUSG00000049723

Mmp12

0.004486

0.166

- 2.43


ENSMUSG00000029816

Gpnmb

0.006717

0.184

- 2.36


تم التعافي عن طريق العلاج القلوي من اعتلال الكلية البلوري (منظم)


ENSMUSG00000027249

F2

2.708e-07

0.004

2.59


ENSMUSG00000057074

Ces1g

1.976e-06

0.006

2.40


ENSMUSG00000043719

Col6a6

0.0002637

0.055

1.74


ENSMUSG00000074575

Kcng1

0.0009703

0.098

1.60


ENSMUSG00000024411

Aqp4

0.0004293

0.069

1.42


ENSMUSG00000042425

فرمبد3

0.000709

0.0887

1.34


ENSMUSG00000031283

Chrdl1

0.0007093

0.089

1.34


ENSMUSG00000019787

صلب

0.00502

0.170

1.29


ENSMUSG00000005716

بفالب

0.004979

0.170

1.25


ENSMUSG00000056752

Dnah9

0.004117

0.160

1.24


الاختصارات: FDR، معدل الاكتشاف الخاطئ؛ أضعاف التغيير، سجل 2 (أضعاف التغيير).









الجدول بالحجم الكامل





المسارات الشائعة الحساسة للحمض والقاعدة في الماوس والإنسان




GO تم استعادته في الماوس عن طريق العلاج القلوي




الجينات المنظمة في الإنسان


النشاط التحفيزي

اذهب:0003824 (مف)

ACADM, ACADSB, ACOT13, ALAD, ALDH3A2, BDH2, BHMT2, CAT, CCND1, ENTPD5, GALM, MSH3, NNMT, PGPEP1, PNPO, RAB29, RABL3, RASD1, SAT2, SHMT1, SUCLG1


نقل الحمض الكربوكسيلي عبر الغشاء

اذهب:0046943 (مف)

SLC26A6, SFXN2


نشاط إنزيم الأكسدة

اذهب:0016491 (مف)

ACADM، ACADSB، ALDH3A2، BDH2، CAT، MT-ND3، MT-ND4l، PNPO، SELENOP


النقل عبر الغشاء

اذهب:0022857 (مف)

KCNJ15، SLC4A4، SCN9A، SLC26A6، SLC4A9


الميتوكوندريا

اذهب:0005739 (CC)

أكادم، أكادسب، ACOT13، ALDH3A2، MT-ND3، MT-ND4l، RAB29، SFXN2، SHMT1، SUCLG1


عمليات استقلاب الأحماض الدهنية

اذهب:0006631 (BP)

ACADM, ACASB, BDH2, ALDH3A2


تنظيم نقل الأحماض الدهنية

الذهاب:2000191 (BP)

بلين2


تنظيم نشاط الهيدرولاز وإصلاح الحمض النووي

اذهب:0051336، اذهب:0006281 (BP)

MSH3


تنظيم دورة الخلية

اذهب:0051726 (BP)

CCND1, DDIT3


المختصرات: BP، العملية البيولوجية؛ CC، المكون الخلوي؛ MF، الوظيفة الجزيئية.









تمت زيادة خلايا CD8 + T عن طريق اعتلال الكلية البلوري، ولكن لم يتم تغيير خلايا الوحيدات الالتهابية بشكل ملحوظ (الشكل التكميلي S9).




يؤثر العلاج القلوي على مسارات مماثلة في اعتلال الكلية البلوري الفأري والكلى البشرية المزروعة

درسنا بعد ذلك ما إذا كانت التغييرات النصية التي لوحظت في نموذج اعتلال الكلية البلوري الفأري يمكن العثور عليها أيضًا في الكلى البشرية. قمنا بمقارنة بيانات الفئران مع بيانات التعبير الجيني من عملية زرع الكلى البشرية

المرضى في ثلاث حالات مختلفة [19]. لم يكن لدى المجموعة الأولى أي حماض ( ن = 9)، وكانت المجموعة الثانية تعاني من حماض استقلابي يُعرف بأنه بيكربونات المصل أقل من 22 مليمول / لتر ( ن = 9)، وكانت المجموعة الأخيرة تعاني من الحماض وتتلقى بيكربونات الصوديوم




(أ)





(أ)

15




خلايا CD3 + T

(ب)




% خلايا



10




5




0




(ج)



(ج)

8




% خلايا



6




4




السيطرة على الأكسالات




MHCII + CD11c + الخلايا الجذعية

*

تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

**

*







ع = 0.043




نظام عذائي

ع = 0.002
















العلاج ع = 0.084




تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.354




(ب)



الخلايا التائية

✱✱✱ ✱✱









8




6




% خلايا



4




2




0






سي دي 8+

سي دي 4+



تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.029




نظام عذائي

ع <0.001




تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



العلاج ع = 0.004




2




0

(و)



(F)



السيطرة على الأكسالات

نظام عذائي

ع = 0.004

العلاج ع = 0.102

علاجي

- + - +



السيطرة على الأكسالات

(د)





















(د) + +

(و)

MHCII + F4/80 + البلاعم

(F)

CD3 - Ly6G - Ly6C + الوحيدات الالتهابية




1.0




% خلايا



0.5




0.0




(ز)





(ز)

1500

CD11b Ly6G العدلات




السيطرة على الأكسالات




Ccl2 مرنا

*** ***









***




تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

ع = 0.464

نظام عذائي

ع = 0.126

العلاج ع = 0.160




(ح)





(ح)

5




4




% خلايا



3




2




1




0




***

*** **



250




السيطرة على الأكسالات




Ccl5 مرنا




تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه









ع = 0.504




نظام عذائي

ع = 0.012




العلاج ع = 0.102

0.4




% خلايا



0.3




0.2




0.1




0.0




السيطرة على الأكسالات












تفاعل ANOVA ثنائي الاتجاه

***

**







ع = 0.009




نظام عذائي

ع <0.001




العلاج ع = 0.017




إشارة مرنا



1000




500

200




إشارة مرنا



150




100




50




علاجية غير معالجة








0

السيطرة على الأكسالات




0

السيطرة على الأكسالات

الشكل 8. يؤثر العلاج القلوي على وفرة الخلايا المناعية (النسبة المئوية للخلايا) في أنسجة الكلى

تم إجراء FACS مع الكريات البيض المعزولة من كلية الفأر بأكملها. (أ) خلايا CD3 + T. (ب) اليسار: مؤامرات FACS التمثيلية تظهر تعبير CD4 وCD8 بين الخلايا التائية. على اليمين: القياس الكمي لخلايا CD4 + (الأزرق) وخلايا CD8 + T (الأرجوانية). (C) MHC-II + CD11c + الخلايا الجذعية، (D) CD11b + Ly6G + العدلات. (E) MHC-II + F4/80 + الخلايا البلعمية، (F) CD3 - Ly6G - Ly6C + الخلايا الوحيدة الالتهابية.

(G) إشارة Ccl2 مرنا المكتشفة بواسطة RNAseq. (H) إشارة Ccl5 mRNA المكتشفة بواسطة RNAseq. الدوائر السوداء = المجموعة غير المعالجة، الحمراء

المربعات = العلاج العلاجي. تم تحليل بيانات FACS بواسطة ANOVA ثنائي الاتجاه للعلاج القلوي وأنواع النظام الغذائي، متبوعًا باختبار Bonferroni اللاحق، * P < 0.05، ** P < 0.01. * باللون الأرجواني يشير فقط إلى بيانات CD4 + . ن = 4–6 / مجموعة لنظام مراقبة الأصول الميدانية. جينات RNAseq DE: تغيير الطية ≥ 0.5، ** P < 0.01، *** P < 0.001، n = 5 / مجموعة.






مكملات لتطبيع مستويات بيكربونات الدم ( ن = 4) [19]. كان لدى جميع مجموعات المرضى وظائف كلى مماثلة بناءً على معدل الترشيح الكبيبي (بدون الحماض 48.0 - + 11.6 مل/دقيقة/1.73 م 2 ، مع الحماض، 31.9 - + 17.7، والحماض والعلاج القلوي: 38.5 - + 11.4، P = 0.085). لقد حددنا 40 جينًا تم تغييرها لدى المرضى الذين يعانون من الحموضة مقارنةً بالمرضى غير المصابين بالحموضة. تمت استعادة التعبير عن ثلاثة من هذه الجينات، ACADSB و KCNJ15 و SMHT1I

عن طريق العلاج القلوي. كما أظهر ثلاثون جينًا زيادة في التعبير عند العلاج بالقلويات، وإن لم يكن ذلك ذا دلالة إحصائية

[19].

هنا، قمنا بمقارنة قوائم الجينات ووجدنا أنه من بين الجينات التي يتم تنظيمها في خزعات الكلى البشرية، أظهرت تسعة منها نفس النمط في الفئران، أربعة منها ( Ddit3، Prlr، Rasd1 ، و Selenop ) كانت ذات دلالة إحصائية والخمسة الأخرى ( Plin2، Sfxn2) ، Msh3، Galm، Aqp7 ) لها قيم P كبيرة ( P < 0.05) ، ولكن ليس تغييرًا كبيرًا في الطية (log2 (تغيير الطية) < 0.5). بالنسبة لستة من هذه الجينات التسعة ( Selenop و Rasd1 و Sfxn2 و Msh3 و Galm و Aqp7 ) تم تغيير التعبير في نفس الاتجاه (إما التنظيم لأسفل أو لأعلى) في البشر والفئران (الشكل التكميلي S10A – F،

[19]). تمت أيضًا استعادة التعبير عن العديد من النصوص للوحدات الفرعية I المعقدة للميتوكوندريا، مثل MT-ND3 و MT-ND4L (الإنسان) و Mt-nd1 و Mt-nd2 (الماوس)، جزئيًا أيضًا عن طريق العلاج القلوي (جدول البيانات التكميلي 1). تنتمي هذه الجينات الأربعين التي تم تغييرها بين المرضى الذين يعانون من الحماض أو لا يعانون منه إلى مسارات تم تنظيم نشاطها




عن طريق العلاج القلوي في الفئران، مثل نقل الغشاء، وعملية التمثيل الغذائي للأحماض الدهنية، ونشاط الأكسدة (الجدول 2، جدول البيانات التكميلي 2).




مناقشة

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



يوضح عدد متزايد من الدراسات السريرية الآثار المفيدة للعلاج القلوي على مرض الكلى المزمن. في حين أظهرت معظم التجارب أن العلاج القلوي يبطئ تطور تدهور وظائف الكلى ويعزز البقاء على قيد الحياة دون غسيل الكلى [4،40-42]. لا تزال هناك فجوات كبيرة في فهم كيفية تسبب الحماض في آثاره الضارة وكيف يمكن أن يكون العلاج بالقلويات مفيدًا. هنا، قمنا بإحداث اعتلال الكلية البلوري في الفئران C57BL/6 وقمنا بتحليل التكيفات الوظيفية والمورفولوجية والمناعية والجزيئية استجابةً لتناول البيكربونات عن طريق الفم، وهو شكل قياسي من العلاج القلوي. يكرر نموذج اعتلال الكلية البلوري السمات المهمة لمرض الكلى المزمن البشري مثل فقر الدم والحماض الأيضي وفرط فوسفات الدم وفرط نشاط جارات الدرق وفرط بوتاسيوم الدم وارتفاع ضغط الدم وأمراض القلب والأوعية الدموية [43]. أيضًا، الأحداث التي تقع أسفل الضرر الذي تسببه البلورات، مثل التمزق الظهاري، وإطلاق الأنماط الجزيئية المرتبطة بالضرر (DAMPs)، والتهاب الأنسجة، والتليف هي أحداث شائعة في أشكال متعددة من مرض الكلى المزمن [44،45]. ومع ذلك، فإن نموذج اعتلال الكلية بالأكسالات لا يمكنه تكرار جميع سمات مسببات مرض الكلى المزمن الأخرى. العلاج القلوي الوقائي يحمي الحيوانات بشكل كامل تقريبًا من تلف البلورات ربما لأن القلويات تزيد من ذوبان بلورات أكسالات الكالسيوم وتمنع ترسب البلورات وتلف الكلى. هذا التأثير الوقائي للعلاج القلوي معروف جيدًا في بيلة السيستين حيث يزيد الرقم الهيدروجيني القلوي من قابلية ذوبان السيستين ويقلل من تكوين البلورات وأمراض الكلى. وبالمثل، في فرط أوكسالات البول الأولي، فإن إضافة سترات البوتاسيوم إلى العلاجات الوقائية الأخرى يمكن أن يقلل من عبء المرض [46،47]. في المقابل، العلاج القلوي العلاجي يمنع خلل الأعضاء كما يتضح من تصحيح فرط مغنيزيوم البول وفرط كالسيوم البول الناجم عن اعتلال الكلية البلوري، إلى جانب تصحيح مستويات علامات وظائف الكلى إلى حد كبير مثل اليوريا في البلازما وتصفية الكرياتينين. بالإضافة إلى ذلك، وكما هو متوقع، قلل العلاج القلوي من إفراز الأمونيوم وقاوم تحمض البول الذي شوهد في الحيوانات غير المعالجة المصابة باعتلال الكلية البلوري.

قد تشرح آليتان متميزتان كيف يمكن للعلاج القلوي أن يعيق تطور مرض الكلى المزمن: منع تنشيط المسار التكميلي البديل بواسطة الأمونيوم [48]؛ الحد من تحفيز محور الأنجيوتنسين-الألدوستيرون-الإندوثيلين عن طريق التحمض المحلي [14،32]. الأدلة على كلتا الفرضيتين تأتي من الفئران المستأصلة الكلية.

يعد انخفاض إفراز الأمونيوم سمة مميزة لمرض الكلى المزمن ويرتبط بنتيجة أسوأ [34]، في حين تم اقتراح تراكم الأمونيوم في الأنسجة كآلية تؤدي إلى التهاب الأنسجة الكلوية [48]. لاحظنا انخفاضًا عابرًا في إفراز الأمونيوم بسبب اعتلال الكلية البلوري، لكن المستويات عادت إلى وضعها الطبيعي أو كانت أعلى قليلاً أثناء الشفاء. بقي التعبير عن نصوص إنزيمات الأمونيا دون تغيير ( Gls و Pck1 ) بسبب اعتلال الكلية البلوري أو انخفض ( Glud1 و Ogdh ). العلاج القلوي منظم بقوة

مستويات التعبير Pck1 بالمقارنة مع جميع المجموعات الأخرى و Glud1 و Ogdh بالنسبة لمجموعات المراقبة. ومع ذلك، كما هو الحال مع العديد من الجينات الأخرى المشاركة في العمليات الالتهابية، فإن مستويات التعبير عن C3 و HC (C5)، الجينات المشاركة في

تم استرداد المسار التكميلي البديل جزئيًا عن طريق العلاج القلوي. لذلك، يحاكي اعتلال الكلية البلوري الخلل النموذجي في تكوين الأمونيا الموجود في مرض الكلى المزمن، وقد تعكس الزيادة في إفراز الأمونيوم في المراحل اللاحقة التعافي الوظيفي لوظائف الكلى.

إن الزيادة في مستويات الألدوستيرون والإندوثيلين والأنجيوتنسين II عن طريق احتباس الحمض المحلي قد تورطت في تطور مرض الكلى المزمن الحساس للعلاج القلوي في نماذج استئصال كلية الجرذ [3،14]. ومع ذلك، في نموذج اعتلال الكلية البلوري الخاص بنا، لم نجد أي دليل على دور هذه الهرمونات: لم تكن مستويات البلازما ولا الألدوستيرون البولي ولا مستويات الإندوثيلين البولية مرتفعة في اعتلال الكلية البلوري. تم تخفيض مستويات التعبير لكل من Ren و Agtr1 mRNA في اعتلال الكلية البلوري، وإذا حدث أي شيء، فقد تم استعادتها عن طريق العلاج القلوي. وهذا يتفق مع دراسة حديثة فشلت في اكتشاف آثار العلاج القلوي في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن على علامات نظام الرينين-أنجيوتنسين-الألدوستيرون الجهازي أو داخل الكلى [49].

نظرًا لأن التفسيرات التقليدية للتأثيرات المفيدة للعلاج القلوي لا تبدو ذات صلة بنموذج اعتلال الكلية البلوري، فقد استكشفنا مسارات جديدة. أظهر تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) وتحليل المسار أن العديد من العمليات البيولوجية والوظائف الجزيئية المشاركة في الاستجابات المناعية التي لم يتم اعتبارها حتى الآن قد تأثرت في اعتلال الكلية البلوري وتم تخفيفها أو عكسها بالكامل عن طريق العلاج القلوي. ومن بين هذه المسارات، كان "النشاط الكيميائي" من فئة GO واحدًا من أكثر الوظائف الجزيئية المحمية بشكل فعال عن طريق العلاج القلوي. إن تحفيز الخلايا المناعية وإطلاق السيتوكينات حساس لدرجة الحموضة والبيكربونات [12،50]. ومع ذلك، لم يتم إثبات دور الرقم الهيدروجيني والتنظيم المناعي الحساس للبيكربونات في الإصابة بأمراض الكلى حتى الآن. في نموذج اعتلال الكلية البلوري الخاص بنا، منع العلاج القلوي ارتفاع الكيموكينات وجزيئات التصاق الخلايا، مثل Cxcl1 و Ccl2 و Ccl5 و Lif و Il1a وVcam1 و Icam1 . ولذلك، قمنا باختبار ما إذا كان العلاج القلوي ينظم تجنيد الخلايا المناعية الكلوية. أدى العلاج القلوي إلى تقليل وفرة الخلايا الوحيدة الالتهابية والخلايا المساعدة CD4 + T، إلى جانب




انخفاض مستويات التعبير عن المنظمين الرئيسيين Ccl2 و Ccl5 ، واستعادة مجموعة من الجينات المرتبطة بتمايز الخلايا التائية وتجميع الخلايا الوحيدة. يتطلب تجنيد الكريات البيض أيضًا جزيئات التصاق الخلايا البطانية، مثل ICAM1 وVCAM1، وكلاهما خاضع للتنظيم على مستوى mRNA عن طريق العلاج القلوي. في الخلايا البطانية السرية البشرية، يحفز الحماض التصاق الخلايا عبر مستقبل البروتين G 4 المنشط بالبروتون ( Gpr4 ) [51،52]. أظهرت النماذج الناقصة لاثنين من GPCRs المنشط بالبروتون، GPR4 ( Gpr4 ) وOGR1 ( Gpr68 ) انخفاض التعبير عن جينات التصاق الخلايا في نماذج مرض التهاب الأمعاء الفئران [53،54]. أدى اعتلال الكلية البلوري إلى زيادة التعبير عن كل من GPCRs، لكن العلاج القلوي قلل فقط من التعبير عن Gpr68 . على العكس من ذلك، في المختبر التجارب المختبرية

أظهرت أن α -klotho يقمع جزيئات التصاق الخلايا ICAM1 وVCAM1 بطريقة تعتمد على TNF [39]. في تجاربنا، على الرغم من تلف الأنسجة الشديد، تم الحفاظ على الكلى α -klotho عند المستويات الطبيعية عن طريق العلاج القلوي في اعتلال الكلية البلوري. الفئران التي تعاني من نقص كلوثو ( kl/kl ) عمرًا أقصر وتعاني من أوعية دموية حادة

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



تكلس [55]. تم تخفيف كلتا الحالتين عن طريق مكملات البيكربونات مع انخفاض مستويات الألدوستيرون في البلازما في كيلولتر / كيلولتر. الفئران [37]. وبالمثل، في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن، أعادت مكملات البيكربونات مستويات البول من كلوثو القابل للذوبان مما يدعم الأهمية الترجمية للملاحظات في نماذج الفئران [17].

ومع ذلك، فإن الآثار الإيجابية للعلاج القلوي لم تكن مصحوبة بانخفاض كبير في إصابة الأنسجة أو التليف، كما لوحظ من خلال مستويات NGAL البولية المماثلة، وتقدير تلطيخ فان جيسون، والتسجيل المرضي، وتأثيرات طفيفة على التعبير عن علامات مجموعات سكانية فرعية محددة. من الخلايا الليفية العضلية بين الحيوانات المعالجة علاجيا وغير المعالجة. أظهرت مستويات Acta2 و Vim mRNA ارتباطات إيجابية قوية مع Ogn و Nkd2 (على التوالي)، وهي علامات لمجموعات سكانية فرعية مختلفة من الخلايا الليفية العضلية. لم يتم تقليل مستويات التعبير عن Ogn ومعظم العلامات الأخرى عن طريق العلاج القلوي، مما يشير إلى أن العلاج القلوي، على الأكثر، كان له دور ثانوي فقط في تقليل الضمور الأنبوبي والتليف. ومع ذلك، فإن انخفاض عدد الخلايا الإيجابية Nkd قد يفسر الانخفاض في مستويات Vimentin mRNA ومستويات البروتين. تشير هذه البيانات إلى أن الظروف الحمضية القاعدية قد تعمل على التمييز بين مجموعات سكانية فرعية محددة من الخلايا الليفية العضلية.

في اليوم الثامن والعشرين بعد إعادة الفئران إلى النظام الغذائي القياسي، كانت البلورات لا تزال مرئية ولكنها متفرقة في أنسجة الكلى بالمقارنة مع العدد الكبير من الرواسب في اليوم الرابع . العلاج القلوي يزيل جزئيًا الرواسب البلورية من خلال العلاج العلاجي، والذي يُترجم إلى أنسجة متليفة أقل ضمورًا قليلاً. ومع ذلك، من المثير للدهشة، أنه عند مقارنة الحيوانات غير المعالجة والمعالجة علاجيًا بكميات مماثلة من المنطقة المتضررة وترسب البلورات، أظهرت الفئران المعالجة علاجيًا ارتفاعًا في تصفية الكرياتينين واليوريا. يشير هذا بقوة إلى أن أكبر فائدة للعلاج القلوي في اعتلال الكلية البلوري قد لا تحدث عن طريق الوقاية من الضرر أو التليف، بل عن طريق التأثيرات الإيجابية على الأنسجة السليمة. معظم المسارات التي يتم تنظيمها بواسطة اعتلال الكلية البلوري ويتم إنقاذها بواسطة العلاج القلوي تشارك في الأنشطة الأيضية، مثل عملية التمثيل الغذائي للأحماض الدهنية، ونشاط الليباز ثلاثي الجليسريد، وارتباط الهيم. قد تدعم هذه العمليات التكيف بشكل أفضل مع انخفاض وظائف الكلى وتمكين عبء عمل أعلى لكل النيفرون.

من أجل تعزيز النتائج التي توصلنا إليها في الفئران وتحديد الآليات الجديدة الإضافية التي قد تشارك في التأثيرات الإيجابية للعلاج القلوي، قمنا بمقارنة بيانات النسخ من نموذج اعتلال الكلية البلوري الفأري مع البيانات الحديثة من خزعات الكلى المزروعة بشريًا من المرضى الذين لا يعانون من اعتلال الكلية البلوري. الحماض، مع الحماض ومع الحماض والعلاج القلوي [19]. والأهم من ذلك، أن الخزعات البشرية قد تم جمعها تحت تأثير كبت المناعة، مما قد يفسر سبب تأثر عدد قليل فقط من الآليات المعتمدة على المناعة بالعلاج القلوي. علاوة على ذلك، كان لدى جميع المرضى معدل معدل الترشيح الكبيبي (eGFR) مماثل مما يشير إلى وجود درجة مماثلة من وظائف الكلى. ومع ذلك، هناك العديد من المسارات المهمة المشتركة بين حالات أمراض الكلى البشرية والفأرية التي تشارك في الغالب في استقلاب الطاقة الخلوية (استقلاب الأحماض الدهنية، ونشاط نقل الغشاء، ونشاط الميتوكوندريا) وكذلك تكاثر الخلايا وسلامتها (إصلاح الحمض النووي، ونشاط الأكسدة والاختزال). ) والتي ظهرت بالفعل من بين أفضل المسارات المنظمة في لعبة cry-

اعتلال الكلية التلي. تبرز ستة جينات يتم تنظيمها بشكل مماثل في الفئران والبشر عن طريق العلاج القلوي: Aqp7، وSelenop، وGalm، وMsh3، وRasd1 ، و Sfxn2 . تؤثر هذه الجينات عادةً بشكل مباشر على استقلاب الخلايا من خلال أنشطة مثل نقل الجلسرين (AQP7) [56]، واستقلاب الحديد بالميتوكوندريا (SFXN2) [57]، والنظام المضاد للأكسدة (SELENOP) [58]،

التحويل بين شذوذات السكريات السداسية (GALM) [57،59]، والمسارات التي ينظمها الديكساميثازون (RASD1)، كما هو الحال في تكوين الشحم الذي يحفزه عامل النمو الشبيه بالأنسولين 1 والأنسولين [60،61]. أظهر تحليل المسار لبيانات النسخ الفأري أن العلاج القلوي في الحيوانات الخاضعة للمراقبة غيّر مسارات مماثلة، على سبيل المثال عمليات التمثيل الغذائي للدهون والكوليسترول والجلوتاثيون. وبالمثل، فإن العلاج القلوي في اعتلال الكلية البلوري يعدل المسارات المرتبطة بتوازن الدهون والكوليسترول والحديد. ومن المثير للاهتمام أن الحماض الأيضي يسبب إجهاد الميتوكوندريا ويغير حالة الأكسدة والاختزال في الميتوكوندريا NAD (نيكوتيناميد الأدينين ثنائي النوكليوتيد) في الأنابيب القريبة والتي بدورها لها تأثير مباشر في استقلاب الدهون [62،63]. التغيرات الحادة نحو أكسدة NAD بواسطة الحمل الحمضي تسبب إصابة في خلايا الأنابيب القريبة، والتي يتم منعها عن طريق المكملات القلوية [62]. لذلك، يشير عملنا إلى أن الآليات التي تتغير بسبب الحماض الأيضي النقي تلعب أيضًا دورًا مشابهًا في نموذج CKD الفأري.




كأحد القيود الرئيسية، لم نوضح إلى أي مدى يمكن أن يصحح بيكربونات الصوديوم عن طريق الفم الحماض الإوبيكربوناتيمي المفترض في الفئران التي تعاني من اعتلال الكلية البلوري. تم اقتراح سترات البول كعلامة مبكرة لاحتباس الحمض [64]، ولكن مستويات السيترات كانت أقل من حد الكشف في عينات البول لجميع الفئران لدينا. قد يجيب القياس المباشر لحموضة الأنسجة على هذا السؤال في المستقبل.

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



باختصار، نكشف عن مسارات غير معروفة سابقًا حساسة للعلاج القلوي في مرض الكلى المزمن لدى الفئران والبشر. كان العلاج بالقلويات فعالاً للغاية في قمع الارتشاح الكلوي و/أو الانتشار المحلي للخلايا الوحيدة الالتهابية والخلايا المساعدة CD4 + T، مما يؤدي إلى تعزيز وظائف الكلى بشكل مستقل عن مستوى التليف والضمور. علاوة على ذلك، فقد أنقذ العديد من المسارات المشوشة المشاركة في استقلاب الخلية. أخيرًا، بالإضافة إلى تقليل إفراز الأمونيوم ومستويات الألدوستيرون المنتشرة، فإن العلاج بالقلويات يحمي مستويات كلوثو الكلى في اعتلال الكلية البلوري. توصلت الأساليب التكاملية المختلفة إلى استنتاجات مماثلة مفادها أن الالتهاب والتمثيل الغذائي عنصران أساسيان لتطور مرض الكلى المزمن [65-67]. لقد أظهرنا هنا أن العلاج القلوي يتفاعل مع هذه الآليات الأساسية ويتجاوز العوامل المقترحة سابقًا. مجتمعين، نعرض مسارات جديدة يتم تنشيطها أثناء أمراض الكلى وحساسة للعلاج القلوي ونوفر الأساس المنطقي لمزيد من الأساليب المستهدفة لهذه المسارات.





وجهات النظر السريرية

لقد ثبت أن تصحيح الحماض الأيضي باستخدام مكملات البيكربونات هو وسيلة منخفضة التكلفة وفعالة لإبطاء تطور مرض الكلى المزمن. لم تثبت الدراسات السريرية الحديثة الفرضيات المقبولة حاليًا حول كيفية حماية العلاج القلوي لوظائف الكلى.





العلاج القلوي عن طريق مكملات البيكربونات يحمي وظيفة الكلى لدى الفئران المعرضة لنموذج CKD الناجم عن تغذية الأكسالات. أدت العلاجات القلوية الوقائية والعلاجية إلى تقليل الخلايا التائية المساعدة وغزو الخلايا الوحيدة الالتهابية، مع حماية مستويات كلوثو الكلوية وإعادة تخزين الوظائف الرئيسية لاستقلاب الخلية. حددت المقارنة بين البيانات النصية لنموذج الفأر CKD والخزعات الكلوية من مرضى زرع الكلى مع أو بدون العلاج القلوي مسارات التمثيل الغذائي الشائعة الحساسة للحمض والقاعدة في أمراض الكلى.





يقدم عملنا رؤية جديدة لكيفية تفاعل المكملات القلوية مع المسارات المناعية والغدد الصماء والتمثيل الغذائي في أمراض الكلى ويسلط الضوء على إمكانية استراتيجيات القلوية لعلاج مرضى مرض الكلى المزمن.






توافر البيانات

جميع البيانات المرتبطة بهذه الدراسة متوفرة في النص الرئيسي أو المواد التكميلية. تتوفر بيانات تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) الخام من GEO access GSE179216.




المصالح المتنافسة

تلقى كارستن فاغنر أتعابًا من Medice C وSalmon Pharma وChugai وArdelyx. حصلت نيلوفار محبي على أتعاب المتحدث من موندي فارما وبوهرنجر إنجلهايم. يعلن جميع المؤلفين الآخرين أنه لا توجد مصالح متنافسة.




التمويل

يتم دعم هذا العمل من قبل مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية من خلال المركز الوطني للكفاءة في مجال البحوث NCCR Kidney.CH. [رقم المنحة N-403-07-25 (إلى بيدرو هنريك إيمينيز سيلفا)]؛ مؤسسة Hartmann Mu¨ ller Stiftung [رقم المنحة 2382 (إلى



بيدرو هنريك إيمينيز سيلفا وكارستن أ. فاغنر)]؛ تم دعم العمل في مختبر جولر من قبل مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية [رقم المنحة PP00P3 181037 (لنيكول جولر)]؛ مجلس البحوث الأوروبي [رقم المنحة 677200 تنظيم المناعة (لنيكول جولر)]؛ مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية [رقم المنحة 176125 (لكارستن أ. فاغنر)]؛ قامت مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية بتمويل دراسة الحفاظ على زراعة الأعضاء [المنحة رقم 166811 (لنيلوفر محبي وكارستن أ. فاغنر)]




مساهمة المؤلف كريديت

إيفا ماريار باستور أرويو: التحليل الرسمي والتحقيق والكتابة والمراجعة والتحرير. نعمة ياسيني: تحليل رسمي، تحقيق-

الرؤية، التصور، المنهجية، الكتابة – المراجعة والتحرير. إليف ساكيري: تحقيق وكتابة ومراجعة وتحرير. جيانكارلو روسو:

التصور، تنظيم البيانات، التحليل الرسمي، التحقيق، الكتابة - المراجعة والتحرير. سولين برجوازي: التحقيق،




الكتابة – المراجعة والتحرير. نيلوفر محبي: المصادر والكتابة والمراجعة والتحرير. كيرستين أمان: تحليل رسمي، تحقيق-

الكتابة – المراجعة والتحرير. نيكول جولر: التصور، التحليل الرسمي، الإشراف، الحصول على التمويل، التحقيق، التصور، المنهجية، الكتابة – المراجعة والتحرير. كارستن أ. فاغنر: التصور والموارد والإشراف والحصول على التمويل والكتابة والمراجعة والتحرير. بيدرو هنريكي إيمينيز سيلفا: التصور، الموارد، تنظيم البيانات، التحليل الرسمي، الإشراف، الحصول على التمويل، التحقيق، التصور، الكتابة - المسودة الأصلية، إدارة المشروع، الكتابة - المراجعة والتحرير.




شكر وتقدير

نشكر كريستيان ستوكمان (جامعة زيوريخ) على المناقشات المفيدة حول بيانات التليف، وماريا دومينيكا موتشيا

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



للحصول على الدعم في مجال تسلسل الحمض النووي الريبي (RNA) (مركز الجينوم الوظيفي في زيوريخ، جامعة زيوريخ). نود أيضًا أن نشكر LAMP (جامعة زيوريخ) على التلوين النسيجي وعلم وظائف الأعضاء القوارض التكاملي في زيوريخ (ZIRP، جامعة زيوريخ)

للتحاليل البيوكيميائية للبول والبلازما. نشكر Betu¨ l Haykir (جامعة زيورخ) على دعمنا في التجارب على الحيوانات.




الاختصارات

مرض الكلى المزمن، مرض الكلى المزمن. DE، معبرًا عنها تفاضليًا؛ eGFR، معدل الترشيح الكبيبي المقدر؛ ESKD، مرض الكلى في نهاية المرحلة. FCS، مصل العجل الجنيني؛ اذهب، علم الجينات؛ H&E، الهيماتوكسيلين ويوزين؛ IFTA والتليف الخلالي والضمور الأنبوبي. KTR، متلقي زرع الكلى؛ NGAL، الليبوكالين المرتبط بالجيلاتيناز؛ SMA - أكتين العضلات الملساء.




مراجع

ليفين، A.، تونيلي، M.، بونفنتر، J. وآخرون. (2017) صحة الكلى العالمية 2017 وما بعده: خارطة طريق لسد الفجوات في الرعاية والبحث والسياسة.

لانسيت نورث آم. إد. 390، 1888–1917، https://doi.org/10.1016/S0140-6736(17)30788-2






Foster، BJ، Mitsnefes، MM، Dahhou، M.، Zhang، X. and Laskin، BL (2018) التغييرات في الوفيات الزائدة الناجمة عن مرض الكلى في المرحلة النهائية في الولايات المتحدة من 1995 إلى 2013. كلين. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 13، 91-99، https://doi.org/10.2215/CJN.04330417




Wesson، DE و Simoni، J. (2009) زيادة حمض الأنسجة تتوسط في انخفاض تدريجي في معدل الترشيح الكبيبي للحيوانات مع انخفاض كتلة النيفرون. كثافة العمليات في الكلى. 75، 929-935، https://doi.org/10.1038/ki.2009.6




Wesson، DE، Buysse، JM and Bushinsky، DA (2020) آليات إصابة الكلى الناجمة عن الحماض الأيضي في أمراض الكلى المزمنة. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 31، 469–482، https://doi.org/10.1681/ASN.2019070677


مادياس، NE (2021) الحماض الأيضي وتطور مرض الكلى المزمن. كلين. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 16، 310-312، https://doi.org/10.2215/CJN.07990520






Raphael، KL (2018) الحماض الأيضي والحماض الأيضي تحت الإكلينيكي في مرض الكلى المزمن. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 29، 376–382، https://doi.org/10.1681/ASN.2017040422




Chen، W. and Abramowitz، MK (2014) الحماض الأيضي وتطور مرض الكلى المزمن. بي إم سي نيفرول. 15، 55، https://doi.org/10.1186/1471-2369-15-55




إيمينيز سيلفا، PH، قطامش بن عباس، C.، تشان، K. وآخرون. (2020) مستقبل سرطان المبيض G المنشط بالبروتون 1 (OGR1) هو المسؤول عن فقدان الكالسيوم الكلوي أثناء الحماض. كثافة العمليات في الكلى. 97، 920-933، https://doi.org/10.1016/j.kint.2019.12.006




Mannon، EC and O'Connor، PM (2020) المكملات القلوية كعلاج في أمراض الكلى المزمنة: ما الذي يتوسط الحماية؟ أكون. جي فيسيول. فسيولوجيا الكلى. 319، F1090 – F1104، https://doi.org/10.1152/ajprenal.00343.2020


Tammaro، G.، Zacchia، M.، Zona، E.، Zacchia، E. and Capasso، G. (2018) التأثيرات الحادة والمزمنة للحماض الأيضي على وظيفة الكلى وبنيتها.

جي نيفرول. 31، 551-559، https://doi.org/10.1007/s40620-018-0493-3






Wesson، DE، Pruszynski، J.، Cai، W. and Simoni، J. (2017) احتباس الحمض مع انخفاض معدل الترشيح الكبيبي يزيد من المؤشرات الحيوية للبول لإصابة الكلى والعظام. كثافة العمليات في الكلى. 91، 914-927، https://doi.org/10.1016/j.kint.2016.10.023




Erra D´ıaz، F.، Dantas، E. and Geffner، J. (2018) كشف التفاعل بين الحماض خارج الخلية والخلايا المناعية. الوسائط. التهاب. 2018، 1-11، https://doi.org/10.1155/2018/1218297




Nath، KA، Hostetter، MK and Hostetter، TH (1985) الفيزيولوجيا المرضية لمرض الأنابيب الخلالي المزمن في الفئران. تفاعلات حمل الأحماض الغذائية والأمونيا والمكون المكمل C3. جيه كلين. يستثمر. 76، 667-675، https://doi.org/10.1172/JCI112020




ويسون، DE، جو، C.-H. و Simoni، J. (2012) مستقبلات أنجيوتنسين II تتوسط في زيادة تحمض النيفرون البعيدة الناجم عن احتباس الحمض. كثافة العمليات في الكلى. 82، 1184-1194، https://doi.org/10.1038/ki.2012.267




Torres، VE، Cowley، Jr، BD، Branden، MG، Yoshida، I. and Gattone، VH (2001) علاج كلوريد الأمونيوم أو بيكربونات الصوديوم على المدى الطويل في نموذجين من مرض الكلى المتعدد الكيسات. نيفرون إكسب. نيفرول. 9، 171-180، https://doi.org/10.1159/000052609




جادولا , إل , نوبوا , أو , ماركيز , إم إن وآخرون . (2004) سيترات الكالسيوم يخفف من تطور الإصابة الكلوية المزمنة. كثافة العمليات في الكلى. 65، 1224-1230، https://doi.org/10.1111/j.1523–1755.2004.00496.x




Hage، V.، Villain، C.، Pelletier، S.، Laville، M.، Drai، J. and Fouque، D. (2019) ملحق بيكربونات يعيد إفراز كلوثو البولي في مرض الكلى المزمن: دراسة تجريبية. J. نوتر الكلى. 29، 285–288، https://doi.org/10.1053/j.jrn.2018.11.001


إجلي-سبيشتيج، D.، إيمينيز سيلفا، PH، جلوديمانز، B. وآخرون. (2019) عامل نخر الورم يحفز عامل نمو الخلايا الليفية 23 مستوى في أمراض الكلى المزمنة والالتهابات غير الكلوية. كثافة العمليات في الكلى. 96، 890-905، https://doi.org/10.1016/j.kint.2019.04.009







إيمينيز سيلفا، PH، ويجاند، A.، دارياديل، A.، روسو، G.، ريتر، A.، جاسبيرت، A. وآخرون. (2021) يرتبط الحماض والعلاج القلوي في مرضى زرع الكلى بالتغيرات النسخية وتغيير وفرة الجينات المشاركة في استقلاب الخلايا والتوازن الحمضي القاعدي. نيفرول. يتصل.

زرع اعضاء. 36 (10)، 1806-1820، https://doi.org/10.1093/ndt/gfab210






أمان، K.، هاس، CS، زيلر، GA، بنز، K.، بدر، BL، هارتنر، A. وآخرون. (2009) يؤدي نقص النيدوجين -2 إلى زيادة ضغط الدم والتلف الكبيبي والأنبوبي الخلالي في ارتفاع ضغط الدم بملح DOCA. يورو. جيه كلين. يستثمر. 39، 116-125، https://doi.org/10.1111/j.1365-2362.2008.02065.x




Daryadel، A.، Bourgeois، S.، Figueiredo، MFL et al. (2016) التوطين المشترك لمستقبل الرينين (Pro)/Atp6ap2 مع H + -ATPases في كلية الفأر ولكن البرورينين لا ينظم بشكل حاد نشاط الخلية H + -ATPase المقحمة. بلوس وان 11، e0147831، https://doi.org/10.1371/journal.pone.0147831




Bolger، AM، Lohse، M. and Usadel، B. (2014) Trimmomatic: أداة تشذيب مرنة لبيانات تسلسل Illumina. المعلوماتية الحيوية 30، 2114-2120، https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btu170




Dobin، A.، Davis، CA، Schlesinger، F.، Drenkow، J.، Zaleski، C.، Jha، S. et al. (2013) STAR: جهاز محاذاة RNA-seq العالمي فائق السرعة. المعلوماتية الحيوية 29، 15-21، https://doi.org/10.1093/bioinformatics/bts635



تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022




لورانس، إم، هوبر، دبليو، بيجيز، إتش، أبويون، بي، كارلسون، إم، جنتلمان، آر وآخرون. (2013) برنامج للحوسبة وشرح النطاقات الجينومية. حساب PLoS. بيول. 9، e1003118، https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1003118




Robinson، MD، McCarthy، DJ and Smyth، GK (2010) edgeR: حزمة موصلات حيوية لتحليل التعبير التفاضلي لبيانات التعبير الجيني الرقمي. المعلوماتية الحيوية 26، 139-140، https://doi.org/10.1093/bioinformatics/btp616




Young، MD، Wakefield، MJ، Smyth، GK and Oshlack، A. (2010) تحليل الجينات لـ RNA-seq: حساب تحيز الاختيار. الجينوم بيول. 11، R14، https://doi.org/10.1186/gb-2010-11-2-r14




Mi، H.، Muruganujan، A.، Ebert، D.، Huang، X. and Thomas، PD (2019) PANTHER الإصدار 14: المزيد من الجينومات، PANTHER GO-slim جديد وتحسينات في أدوات تحليل التخصيب. الدقة الأحماض النووية. 47، D419 – D426، https://doi.org/10.1093/nar/gky1038




Nistala، R.، Meuth، A.، Smith، C. and Annayya، A. (2016) استخراج موثوق وعالي الكفاءة للخلايا المناعية في الكلى. جي فيس. إكسب. 114، 54368، https://doi.org/10.3791/54368


https://www.R-project.org/ فريق تطوير R الأساسي (2011) R: لغة وبيئة للحوسبة الإحصائية. مؤسسة آر للحوسبة الإحصائية ، فيينا، النمسا


مولاي، إس آر، كولكارني، أو بي، روباناجودي، كيه في وآخرون. (2013) تحفز بلورات أكسالات الكالسيوم التهاب الكلى عن طريق إفراز IL-1 β بوساطة NLRP3 . ج.

كلين. يستثمر. 123، 236-246، https://doi.org/10.1172/JCI63679




كوبي، سي.، إبراهيم، إم إم، كرانز، جيه. وآخرون. (2020) فك رموز أصول الخلايا الليفية العضلية في تليف الكلى البشري. الطبيعة 1-9


Wesson, DE and Simoni, J. (2010) احتباس الحمض أثناء الفشل الكلوي يؤدي إلى إنتاج الإندوثيلين والألدوستيرون مما يؤدي إلى انخفاض تدريجي في معدل الترشيح الكبيبي، وهو الوضع الذي تم تحسينه عن طريق النظام الغذائي القلوي. كثافة العمليات في الكلى. 78، 1128-1135، https://doi.org/10.1038/ki.2010.348






Wesson، DE، Simoni، J.، Broglio، K. and Sheather، S. (2011) يصاحب احتباس الحمض انخفاض معدل الترشيح الكبيبي لدى البشر ويزيد من مستويات البلازما للإندوثيلين والألدوستيرون. أكون. جي فيسيول. فسيولوجيا الكلى. 300، F830 – F837، https://doi.org/10.1152/ajprenal.00587.2010




فاليت، M.، ميتزجر، M.، هايمان، J.-P. وآخرون. (2015) الأمونيا البولية والنتائج طويلة المدى في أمراض الكلى المزمنة. كثافة العمليات في الكلى. 88، 137-145، https://doi.org/10.1038/ki.2015.52




هارونا، واي، كاشيهارا، ن.، ساتوه، م.، توميتا، ن.، ناميكوشي، تي، ساساكي، تي وآخرون. (2007) تحسين الإصابة الكلوية التدريجية عن طريق التلاعب الجيني لجين كلوثو. بروك. ناتل. أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية 104، 2331-2336




Hu، MC، Kuro-o، M. and Moe، OW (2012) يفرز كلوثو وأمراض الكلى المزمنة. حال. إكسب. ميد. بيول. 728، 126-157، https://doi.org/10.1007/978-1-4614-0887-1˙9




Leibrock، CB، Voelkl، J.، Kohlhofer، U.، Quintanilla-Martinez، L.، Kuro-o، M. and Lang، F. (2016) التكلس الحساس للبيكربونات وعمر الفئران التي تعاني من نقص كلوثو. أكون. جي فيسيول. فسيولوجيا الكلى. 310، F102 – F108، https://doi.org/10.1152/ajprenal.00037.2015


Zhu، L.، Stein، LR، Kim، D.، Ho، K.، Yu، G.-Q.، Zhan، L. et al. (2018) يتحكم كلوثو في واجهة الجهاز المناعي للدماغ في الضفيرة المشيمية. بروك. ناتل.

أكاد. الخيال العلمي. الولايات المتحدة الأمريكية 115، E11388 – E11396، https://doi.org/10.1073/pnas.1808609115






مايكاوا، واي.، إيشيكاوا، ك.، ياسودا، أو.، أوغورو، آر.، هاناساكي، إتش.، كيدا، آي. وآخرون. (2009) يقوم كلوثو بقمع التعبير الناجم عن TNF- α لجزيئات الالتصاق في البطانة ويخفف من تنشيط NF- κ B. الغدد الصماء 35, 341-346




Wesson، DE، Mathur، V.، Tangri، N.، Stasiv، Y.، Parsell، D.، Li، E. et al. (2019) فيفيريمر مقابل الدواء الوهمي في المرضى الذين يعانون من الحماض الأيضي المرتبط بمرض الكلى المزمن: تجربة متعددة المراكز، عشوائية، مزدوجة التعمية، خاضعة للرقابة، المرحلة 3. لانسيت نورث آم. إد. 393، 1417–1427، https://doi.org/10.1016/S0140-6736(18)32562-5




de Brito-Ashurst، I.، Varagunam، M.، Raftery، MJ and Yaqoob، MM (2009) مكملات البيكربونات تبطئ تطور مرض الكلى المزمن وتحسن الحالة التغذوية. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 20، 2075-2084، https://doi.org/10.1681/ASN.2008111205




جورايا، إن، سيموني، جيه، جو، سي.-إتش. و Wesson, DE (2014) علاج الحماض الأيضي لدى المرضى الذين يعانون من المرحلة الثالثة من مرض الكلى المزمن بالفواكه والخضروات أو البيكربونات عن طريق الفم يقلل من مولد الأنجيوتنسين في البول ويحافظ على معدل الترشيح الكبيبي. كثافة العمليات في الكلى. 86، 1031-1038، https://doi.org/10.1038/ki.2014.83




مولاي، ريال، إبرهارد، JN، بفان، V. وآخرون. (2016) مرض الكلى المزمن الناجم عن الأكسالات مع مضاعفاته البولينية والقلب والأوعية الدموية في الفئران C57BL / 6. أكون. جي فيسيول. فسيولوجيا الكلى. 310 (8)، F785 – F795، https://doi.org/10.1152/ajprenal.00488.2015


Andrade-Oliveira, V., Foresto-Neto, O., Watanabe, IKM, Zatz, R. and Caˆmara, NOS (2019) الالتهاب في أمراض الكلى: اللاعبون الجدد والقدامى. أمام.

فارماكول. 10، 1192، https://doi.org/10.3389/fphar.2019.01192






مولاي، ريال وأندرس، H.-J. (2017) اعتلال الكلية البلوري: آليات إصابة الكلى الناجمة عن البلورة. نات. القس نفرول. 13، 226-240، https://doi.org/10.1038/nrneph.2017.10


كوتشات، P.، هولتون، S.-A.، أكوافيفا، C. وآخرون. (2012) فرط أوكسالات البول الأولي من النوع 1: مؤشرات للفحص والتوجيه للتشخيص والعلاج.

نيفرول. يتصل. زرع اعضاء. 27، 1729–1736، https://doi.org/10.1093/ndt/gfs078






D'Ambrosio، V.، Capolongo، G.، Goldfarb، D.، Gambaro، G. and Ferraro، PM (2021) البيلة السيستينية: تحديث في الفيزيولوجيا المرضية وعلم الوراثة والإدارة السريرية. طب الأطفال. نيفرول. ، على الإنترنت قبل الطباعة، https://doi.org/10.1007/s00467-021-05342-y





Nath، KA، Hostetter، MK and Hostetter، TH (1991) زيادة تكوين الأمونيا كمحدد للإصابة الكلوية التقدمية. أكون. J. ديس الكلى. 17، 654-657، https://doi.org/10.1016/S0272-6386(12)80344-1






Bove´e، DM، Roksnoer، LCW، van Kooten، C.، Rotmans، JI، Vogt، L.، de Borst، MH et al. (2020) تأثير مكملات بيكربونات الصوديوم على نظام الرينين أنجيوتنسين في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن والحماض: تجربة سريرية عشوائية. جي نيفرول. 34 (5)، 1737-1745، https://doi.org/10.1007/s40620-020-00944-5




راي، SC، بابان، B.، تاكر، MA وآخرون. (2018) يقوم NaHCO3 عن طريق الفم بتنشيط مسار الطحال المضاد للالتهابات: دليل على أن الإشارات الكولينية تنتقل عبر الخلايا الظهارية المتوسطة. جي إمونول. 200، 3568–3586، https://doi.org/10.4049/jimmunol.1701605




Chen، A.، Dong، L.، Leffler، NR، Asch، AS، Witte، ON and Yang، LV (2011) تنشيط GPR4 بواسطة الحماض يزيد من التصاق الخلايا البطانية من خلال مسار cAMP / Epac. بلوس وان 6، e27586، https://doi.org/10.1371/journal.pone.0027586




Dong، L.، Li، Z.، Leffler، NR، Asch، AS، Chi، J.-T. و Yang، LV (2013) تنشيط الحماض لمستقبلات GPR4 المستشعرة للبروتون يحفز الاستجابات الالتهابية للخلايا البطانية الوعائية التي كشف عنها تحليل النسخ. بلوس وان 8، e61991، https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061991


دي فاليير، سي، وانغ، واي، إلورانتا، جي جي وآخرون. (2015) مستقبل استشعار الرقم الهيدروجيني المرتبط بالبروتين G OGR1 هو منظم للالتهابات المعوية. التهاب.

تم التنزيل من http://portlandpress.com/clinsci/article-pdf/136/8/557/932006/cs-2022-0095.pdf بواسطة مستخدم Universitat Zurich في 05 أغسطس 2022



ديس الأمعاء. 21، 1269-1281، https://doi.org/10.1097/MIB.0000000000000375






وانغ، Y.، دي فاليير، C.، سيلفا، I. وآخرون. (2018) يقوم مستقبل GPR4 المنشط بالبروتون بتعديل الالتهاب المعوي. جي كرونز التهاب القولون 12، 355-368، https://doi.org/10.1093/ecco-jcc/jjx147




Leibrock، CB، Alesutan، I.، Voelkl، J.، Pakladok، T.، Michael، D.، Schleicher، E. et al. (2015) علاج NH 4 Cl يمنع تكلس الأنسجة في نقص كلوثو. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 26، 2423–2433، https://doi.org/10.1681/ASN.2014030230




Sohara، E.، Rai، T.، Miyazaki، J.، Verkman، AS، Sasaki، S. and Uchida، S. (2005) نقل الماء والجلسرين المعيب في الأنابيب القريبة من الفئران القاضية AQP7. أكون. جي فيسيول. فسيولوجيا الكلى. 289، F1195 – F1200، https://doi.org/10.1152/ajprenal.00133.2005


Mon، EE، Wei، F.-Y.، Ahmad، RNR، Yamamoto، T.، Moroishi، T. and Tomizawa، K. (2019) تنظيم توازن الحديد في الميتوكوندريا بواسطة Sideroflexin

2. جي فيسيول. الخيال العلمي. 69، 359-373، https://doi.org/10.1007/s12576-018-0652-2






ميتا، Y.، ناكاياما، K.، إيناري، S. وآخرون. (2017) تعمل الأجسام المضادة المحايدة للبروتين السيلينوبروتين P على تحسين إفراز الأنسولين وحساسية الجلوكوز في نماذج الفئران المصابة بداء السكري من النوع 2. نات. مشترك. 8، 1658، https://doi.org/10.1038/s41467-017-01863-z




Timson، DJ and Reece، RJ (2003) تحديد وتوصيف الألدوز 1-إيبيميراز البشري. فيبس ليت. 543، 21-24، https://doi.org/10.1016/S0014-5793(03)00364-8




كيم، HJ، تشا، JY، سيوك، JW وآخرون. (2016) يربط Dexras1 الجلايكورتيكويدات بعامل النمو الشبيه بالأنسولين -1 الذي يشير إلى تكوين الشحم. الخيال العلمي. النائب 6، 28648، https://doi.org/10.1038/srep28648




تان، جي جي، أونج، سا، وتشن، ك.-س. (2011) يتفاعل Rasd1 مع Ear2 (Nr2f6) لتنظيم نسخ الرينين. بي إم سي مول. بيول. 12، 4، https://doi.org/10.1186/1471-2199-12-4




Bugarski، M.، Ghazi، S.، Polesel، M.، Martins، JR and Hall، AM (2021) التغييرات في NAD واستقلاب الدهون تؤدي إلى إصابة الكلى الحادة الناجمة عن الحماض. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 32، 342-356، https://doi.org/10.1681/ASN.2020071003


نامبا، T.، تاكاباتاكي، Y.، كيمورا، T. وآخرون. (2014) التطهير الذاتي للميتوكوندريا في الكلى يتواءم مع الحماض الأيضي. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب.

نيفرول. 25، 2254–2266، https://doi.org/10.1681/ASN.2013090986






Goraya، N.، Simoni، J.، Sager، LN، Madias، NE and Wesson، DE (2019) إفراز سترات البول كعلامة على احتباس الحمض في المرضى الذين يعانون من مرض الكلى المزمن دون الحماض الأيضي العلني. كثافة العمليات في الكلى. 95، 1190-1196، https://doi.org/10.1016/j.kint.2018.11.033


Eddy، S.، Mariani، LH and Kretzler، M. (2020) مناهج متكاملة متعددة الأوميكس لتحسين تصنيف أمراض الكلى المزمنة. نات. القس نفرول.

16، 657-668، https://doi.org/10.1038/s41581-020-0286-5




كانغ، جلالة، اهن، ش، تشوي، P. وآخرون. (2015) تلعب أكسدة الأحماض الدهنية المعيبة في الخلايا الظهارية الأنبوبية الكلوية دورًا رئيسيًا في تطور تليف الكلى.

ليلة. مع. 21، 37-46، https://doi.org/10.1038/nm.3762






مارتيني، S.، ناير، V.، كيلر، BJ وآخرون. (2014) تحدد البيولوجيا التكاملية شبكات النسخ المشتركة في CKD. ج. صباحا. شركة نفط الجنوب. نيفرول. 25، 2559–2572، https://doi.org/10.1681/ASN.2013080906